
English: 
So welcome to this new lecture on the course
uhh functional genomics The previous lecture
we have looked into how genes can be uhh knockout
meaning mutated in animal models like mouse
Wherein we discussed uhh how a specific region
of the gene can be deleted uhh therefore you
can understand the function of the gene in
the organism But uhh you know although this
is very powerful uhh technique to understand
the gene function this approach has its own
limitation and that’s true for any approach
It has its own merits and uhh some undesirable

Hindi: 
तो पाठ्यक्रम कार्यात्मक
जीनोमिक्स (functional genomics)
पर इस नए व्याख्यान
(lecture) में आपका स्वागत
है।
पिछले व्याख्यान
(lecture) में हमने देखा
है कि कैसे जीन को
माउस जैसे पशु मॉडल

English: 
uhh characteristics for which we have to overcome
with some other approach For example when
you go for a global knockout of a gene wherein
you wish to delete the gene and all the cells
of an organism If the organism can survive
and you will be able to see the phenotype
but that at times you know uhh there are challenges
For example uhh you know when you knockout
a gene that embryonic development this compromise
therefore you will never see an animal coming
out out of birth Therefore people have developed
a new approach called conditional knockout
meaning you delete the gene only in a group
of cell or tissue or when you want the gene
to be deleted not right from the word go and
that is what highlighted in this slide here
that restricting the mutation of a particular
to your particular tissue If you can restrict
that then probably you know you will be able
to decipher the function of a given gene in
a given tissue so that really helps because

Hindi: 
में म्यूट किया जा
सकता है।
जिसमें हमने चर्चा
की कि जीन के एक विशिष्ट
क्षेत्र को कैसे
हटाया जा सकता है
इसलिए आप प्रति जीव
में जीन (gene) के कार्य
को समझ सकते हैं।

English: 
it is not that all the genes are you know
the function is restricted to given tissue
So it may be working in several tissue so
when you knockout the phenotype that you see
n phenotype You really do not know uhh you
know is resulting from a defect in a particular
system or tissue or is it you know an effect
of uhh compromise in multiple organs and tissue
systems and so on So genes that have more
than one function and uhh more than one stage
for example they could have functional development
and after that ones the animal becomes adult
they may have some specialized functions so
if you really want understand how the gene
contribute to this two distinct for example
phase of development then you want to restrict
the mutation to your certain developmental
stage or to a certain tissue
So that’s the global knockdown that we discussed
in the last class You know if it becomes you

Hindi: 
लेकिन आप जानते हैं
कि जीन फ़ंक्शन (gene
function) को समझने के लिए
यह एक बहुत ही शक्तिशाली
तकनीक (powerful technique) है,
इस दृष्टिकोण की
अपनी सीमा है और किसी
भी दृष्टिकोण के
लिए यह सच है।
इसकी अपनी खूबियां
और कुछ अवांछनीय

Hindi: 
विशेषताएं (undesirable characteristics)
हैं जिनके लिए हमें
कुछ अन्य दृष्टिकोण
के साथ पार करना होगा।
उदाहरण के लिए जब
आप किसी जीन (gene) के
ग्लोबल नॉकआउट (global
knockout) के लिए जाते हैं,
जिसमें आप जीन और
एक जीव की सभी कोशिकाओं
को हटाना चाहते हैं।

English: 
know a gene is so critical that their embryo
dies so that will not really help us to understand
the function of the gene in the adult because
you are last embryo because it only tells
you that it is critical for the development
but it does not tell you ask to what is a
function of the gene in the adult or in given
tissue and so on So the approach is to inactivate
the gene in a given tissue not in the embryonic
stem cells like we discuss if you a recall
the discussion he said that we will introduce
the cassette knockdown cassette into the embryonic
stem cells and the gene is deleted and you
are going use this embryonic stem cells to
create the embryo chimera and then and then
eventually you will get the global knockdown
So that that you know if it is embryonic lethal
the embryo does not survive or if it has a
problem with reproduction then you are not
going see uhh that phenotype in successive
generation so loose the line that you have
created So if we can restrict you know the
mutation to a specific tissue or mutation
happening only at later stage of development

Hindi: 
यदि जीव जीवित रह
सकता है और आप फेनोटाइप
(phenotype) को देख पाएंगे,
लेकिन कई बार आप जानते
हैं कि चुनौतियां
हैं।
उदाहरण के लिए, आप
जानते हैं, जब आप एक
ऐसे जीन (gene) को पीटते
हैं, जो भ्रूण (embryonic)

English: 
or when you want that then it helps you to
dissect the gene function in all the tissue
that gene express in different development
stage and so on So that’s where you have
the you know uhh next generation of knockout
approach which is called this conditional
knockout that really help us to dissect the
function of the gene
Let’s see what is the difference between
the global knockout that we discussed uhh
as compare to the restricted what you call
as condition knock knockout approach The difference
comes in the way you create the cassette the
DNA vector their use to knockout the particular
gene So the difference here you as you can
see here So you can see there in global knockout
what you do is that you take the flanking
region of a gene uhh or a segment of the gene
which you want to disrupt you want to knockout
So here what we do in this kind of conditional

English: 
knockout you really do not delete that you
know the segment that you want be deleted
in the cassette itself in the targeting cassette
itself but rather you introduce some new sites
So that’s what shown here in the green you
can see here on either side of it
So these are exon one two and three and then
you want to delete if you ever a miss to remove
all these three exons of gene therefore uhh
you know you sort of understand the function
of the gene because it has lost its function
what you do is whichever region that you wish
to delete on either side of it you add your
small sequence which is called as loxp sites
So you can go to the literature and found
what it is a small sequences and these are
the sequence that are identified by a recombinase
which is bacterial and these recombinase what
it does is it promotes what is called is sites-specific
recombination meaning when there are sites
uhh you know adjacent segment of you know
insist meaning in the same DNA the recombinase

Hindi: 
के विकास के साथ खुद
समझौता करता है, इसलिए
आपको कभी भी जन्म
से बाहर एक जानवर
दिखाई नहीं देगा।
इसलिए, लोगों ने एक
नया दृष्टिकोण विकसित
किया है जिसे सशर्त
नॉकआउट कहा जाता
है, जिसका अर्थ है
कि आप केवल कोशिका

English: 
will identify these sites and whatever is
in between these two sites it will be deleted
and the DNA fragment uhh you know that is
removed now that region gets filled in therefore
the genome is restored but your last tail
segment
For example between this site and this site
you know whatever is in between that will
be last because a cre recombinase So you have
to have it to generate the conditional knockout
first you create your targeting vector in
which you are able to you know put or introduced
the loxP sites on the region with in which
you want delete the gene So for example here
you have added loxP sites in the cassette
and then the procedure is same so you introduced
this inside embryonic stem cells you go for
a positive selection or negative selection
and make the animal and so on But as strong
as the loxp sites are there in intronic region
for example in this shown these are very small
sequence that are normally do not affect the
function of the gene

Hindi: 
(cell) या ऊतक (tissue) के समूह
में जीन (gene) को हटाते
हैं या जब आप चाहते
हैं कि जीन को शब्द
से सही नहीं हटाया
जाए और इस स्लाइड
में यहां बताया गया
है कि किसी विशेष

Hindi: 
के उत्परिवर्तन (mutation)
को अपने विशेष ऊतक
तक सीमित करना।
यदि आप इसे प्रतिबंधित
कर सकते हैं तो शायद
आप जानते हैं कि आप
किसी दिए गए ऊतक (tissue)
में दिए गए जीन (gene)
के कार्य को समझने
में सक्षम होंगे,
जिससे वास्तव में

English: 
So in other words even if you have introduce
loxP sites and the the gene is functional
because it may be the sides there in the intron
so when they RNA is being made its splice
or it does not really affect the function
So by creating an animal which has these loxp
sites on either side of a gene segment which
you want to delete this animal is normal because
it is normally it is functional so when would
you delete the gene because that’s the beauty
of the system So you can condition it meaning
you can restrict the deletion happening only
inside in tissue or a particular development
will stage as you wish okay
So for that to happen you have to have the
protein what you called as cre recombinase
okay this is as I told you these are bacterial
origin so it is not normally expressed in
in mouse and rat and whichever organism at
least you are trying to create conditional
mutated Therefore what you need is you need
to have a transgenic animal meaning an animal

English: 
which is expressing your foreign gene therefore
it’s protein that is required in this case
it is a transgenic uhh animal which expresses
the cre recombinase okay So that is what shown
here so now what transgene you would use or
which transgenic line you would use It all
depends on your your plan like where do you
want to delete the gene for example what you
shown here is a cre recombinase this is coding
sequence of the cre recombinase and you have
you know linked that coding sequence to promote
of a gene which is normally expressed in astrocytes
These are a specialised group of cell that
are present only in the central nervous system
Say in the brain these are not neurons these
are non-neuronal tissues but restricted to
nervous system Now what is unique about this
is that since we have you know driving these
cre recombinase coding sequence and their
a promoter of a gene that is normally expressed

Hindi: 
मदद मिलती है क्योंकि
यह नहीं है कि सभी
जीन (gene) आप जानते हैं
कि फ़ंक्शन दिए गए
ऊतक (tissue) तक सीमित
है।
तो यह कई ऊतक में काम
कर सकता है, इसलिए
जब आप फेनोटाइप (phenotype)
को समाप्त हैं जिसे

Hindi: 
आप अंतिम फेनोटाइप
(phenotype) देखते हैं।
आप वास्तव में नहीं
जानते हैं कि आप जानते
हैं कि यह एक विशेष
प्रणाली या ऊतक में
दोष के कारण होता
है या क्या आपको पता
है कि यह कई अंगों
और ऊतक प्रणालियों

English: 
in astrocytes so if you know the cre recombinase
is express in the cell only in those cells
your knock down or knock out will take place
For example when you cross this these two
animals the one that has the loxP sites with
the animal that carrying the recombinase when
you when you get these hybrid which has got
both now in this animal you know in astrocytes
this differentiated cells
You would have cre recombinase therefore the
knockout or the gene will be deleted only
in this cells In other tissue for example
digest system or even the neuron or during
development this gene is for absolutely for
normal therefore you do not see any uhh you
know defects So whatever affect that you are
going to see now is because of the last of
the gene in astrocytes that with with confidence
you can say that Now say suppose this gene
is also express in intestine for example the
whatever gene that you want to delete so how
would you uhh test the function of the gene
in intestine so again you to have a transgenic

Hindi: 
(tissue systems) और इतने पर
समझौता करने का एक
प्रभाव है।
इसलिए जिन जीनों
में एक से अधिक कार्य
होते हैं और उदाहरण
के लिए एक से अधिक
अवस्था में वे विकास
में कार्य कर सकते

English: 
animal in which the cre recombinase is expressing
in the you know cells that are therein the
intestine
So if you do that you are going delete the
gene intestine or in testis or in ovary or
in lung So it all depends now once you have
created a conditional knockout animal wherein
in the loxP sites or inserted and either side
of the gene now it all uhh depends on you
with which you know the transgenic animal
that express cre recombinase your crossing
So you can choose the uhh you know transgenic
animal that express cre recombinase and then
whichever disease cell you will be able to
delete so that is called as you know a conditional
knockout So for example here what happens
is when you have cre recombinase is going
to go and identify those to LoxP sites and
then introduce what is called as site specific
recombination
So what happens in these cases the recombinase
you know you have this is your DNA and you

English: 
have LoxP sites here the cre recombinase actually
helps in bringing this two sites together
there it can do by something like this So
you this site this site came together and
the recombinase sits here and basically cuts
the DNA here and here Therefore you have linear
DNA in which the recombinase cut exactly at
the LoxP sites and introduced then you would
properly have a circular DNA which has a recombinase
site these LoxP sites but this will not survive
because is not going to have application or
gene is not going to have telomere it’s
not going to have centromere so within few
you know deviation it would be last say it
is not functional but this is part of your
chromosomal DNA
But whatever DNA element that was part of
the gene that was present in between is deleted
so in this way you are able to delete the
gene you know by driving the recombinase in
whichever tissue you want to do this In fact
the technique is so robust that you can now

Hindi: 
हैं और उनके बाद पशु
वयस्क हो जाते हैं,
उनके कुछ विशेष कार्य
हो सकते हैं, यदि आप
वास्तव में यह समझना
चाहते हैं कि जीन
(gene) इन में कैसे योगदान
करते हैं?
विकास के उदाहरण
के चरण के लिए दो अलग-अलग

Hindi: 
तो आप अपने निश्चित
विकास के चरण या एक
निश्चित ऊतक के लिए
उत्परिवर्तन (mutation)
को प्रतिबंधित करना
चाहते हैं।
इसलिए यह ग्लोबल
नाक्डाउन (global knockdown)
है जिसकी हमने अंतिम
कक्षा में चर्चा
की थी।
आप जानते हैं कि अगर
आपको पता है कि एक

English: 
a days we can pretty much you know uhh decide
when do you want to delete the gene For example
this there are drugs that are available when
you feed the animal with the drug a given
gene may be turn on So assume that you know
the cre recombinase is under a promoter which
is you know whose expression you can uhh sort
of tune from you know what you are feeding
to the animal So in this way you can desire
us to when you can induce a cre recombinase
and and you can shut down the gene
So this is a powerful technique and people
are now trying to understand for example during
ageing process or a good disease model you
know whether you know you will be able to
bring in some therapeutic approach all these
are being tested by creating such kind of
animals So that is a very very powerful tool
So I will you one such example where uhh you
know there are advancements that really helped
us to understand the human disease using this

Hindi: 
जीन (gene) इतना महत्वपूर्ण
है कि भ्रूण मर जाता
है तो इससे वास्तव
में हमें वयस्क में
जीन के कार्य को समझने
में मदद नहीं मिलेगी
क्योंकि आप भ्रूण
(embryo) को खो चुके हैं
क्योंकि यह केवल
आपको बताता है कि

English: 
kind of conditional uhh knockout models
For example one of the very very common neuro
neurological disorders is known as Rett syndrome
The Rett syndrome is a you know in human it
is mental retardation and its known that it
is you know so on but what is amazing is that
there are not many uhh male patient that were
known to have Rett syndrome So that where
the theory is either it is they do not survive
or it does not affect the male its very milder
phenotype and so on and what is when they
identified the gene for these Rett syndrome
then what they found was very surprising because
the gene that is mutated and leading to the
Rett syndrome phenotype it is protein that
is expressed in wide variety of cells in fact
it is incubate is meaning it is expressed
in every cell type that you can think of and
second it has a very very generic function

English: 
at least from functional point of view because
this is a protein that goes and binds to uhh
regions in the genome
Which are methylated uhh cytosine bases these
are called as a CpG I lands which are normally
present in the promote original many genes
when the cytosine in such CpG phos that is
P stand for the phosphate When you have such
methylation then more often these genes are
mocked for a you know kind of silencing meaning
it should not express and so on So this is
consulate to be transcriptional factor which
identify subsequence and modulate the gene
expression and is expressed in variety of
tissues and CpG methylation is known in all
the tissue tissue types So they never it was
surprise when they found that this is gene
that is causing the Rett syndrome because
it is purely a neurological phenotype I mean
you otherwise you do not have any problem
except that these kids are mentally retarded
their IQ level is very low and so on

Hindi: 
यह महत्वपूर्ण है
विकास लेकिन यह आपको
यह नहीं बताता है
कि वयस्क में या दिए
गए ऊतक और इतने पर
जीन (gene) का क्या कार्य
है।
इसलिए यह दृष्टिकोण
भ्रूण (embryonic) के स्टेम

Hindi: 
सेल (stem cell) में नहीं,
बल्कि एक निश्चित
ऊतक (tissue) में जीन (gene)
को निष्क्रिय करने
के लिए है जैसे कि
हम चर्चा करते हैं,
यदि आप चर्चा को याद
करते हैं, तो यह कहा
जाता है कि हम कैसेट
(cassette) नॉकडाउन (knockdown)

English: 
So this was surprise so then they would like
to really dis dissect how this gene may cause
a neurological phenotype though the gene is
expressed in wide variety of tissues It is
expressed in neuron in the nervous system
It is also express in the non-neuronal cells
in the nervous system and there was one study
before that were they have knockout the gene
in uhh you know in mouse and then the embryo
did not survive even you know a for embryonic
growth this particular gene was you know consulate
to be very very essential So they went induce
this particular model conditional model wherein
they have driven the cre recombinase under
a promoter of a gene which is normally expressed
in a differentiated neuron okay
So therefore once the you know the animal
is uhh you know sort of grown and have a differentiated
neurons and you will not have the cre recombinase
but the moment a neuron differentiate the
cre recombinase would express because it is
under a control of a gene which is normally

English: 
expressed in the differentiated neuron So
now the recombinase would go and introduce
the deletion because otherwise a loxP sites
are normally it allows the gene to perform
function but once you have the cre recombinase
its sort of results in the deletion of the
segment of the DNA that are between the two
loxP sites as a result these neurons now lost
this particular protein and then they looked
at the phenotype of the gene is the mouse
They have understood as to what goes wrong
in such condition therefore you have a mental
retardation phenotype and now in fact this
animal model is being used for you know screening
drug and there are very beautiful you know
uhh studies which we have identified drug
molecule that are in clinical trial so that
really talks about how powerful this kind
of approaches in understanding the disease
process and that can be translated for the
human So you can see here now what we are
talking about is uhh the brain weight because

Hindi: 
कैसेट (cassette) को भ्रूण
(embryonic) स्टेम कोशिकाओं
(stem cells) में पेश करेंगे
और जीन को हटा दिया
जाता है।
और आप इस भ्रूण स्टेम
कोशिकाओं (embryonic stem cells)
का उपयोग करके भ्रूण
(tissue) के चिमेर (chimera)
बनाने के लिए जा रहे
हैं और फिर अंततः

English: 
you know often you must have seen when the
baby is born one of the physical examination
that is done normally every ones in six months
to look into the size of the head
So heads are confirms they normally measure
because that is an indicator as to whether
the baby is growing normally or not Normally
the patient that their kids that have suffer
from neurological phenotype the circumference
could be you know somewhat smaller or lower
than what you see in the normal per patient
So this is a study which really dissected
and showed that you know that when when you
lose this protein only in the neuron you now
you have a phenotype the symptoms that are
very similar to what you see in the in the
human condition So that you know otherwise
you know you are unable to study this because
we are knockout in every cell they embryo
dies than your not having a model to study
in the adults so this really helps us So likewise
there are number of studies people have used
this model to understand the function of the
protein

Hindi: 
आपको ग्लोबल नाक्डाउन
(global knockdown) मिलेगी।
ताकि आपको पता चल
जाए कि क्या यह भ्रूण
घातक (embryonic lethal) है, भ्रूण
(embryo) जीवित नहीं रहता
है या यदि उसे प्रजनन
(reproduction) में कोई समस्या
है, तो आप उस पीढ़ी
के फेनोटाइप (phenotype)

English: 
Now that is one model but what you need to
understand is that creating a transient you
know knockout construct uhh is a very very
tedious process because you know it requires
manipulating the genome and creating a construct
and things like that So it is really you know
time consuming and and a probably it is quite
good in case of model where you are able to
have the genome sequence then you know genome
uhh what you call as structural wall genes
are known and so on but it is not kind of
universal you can applied to everything It
has its own limitations So therefore in parallel
there are many other approaches that are being
tried out Now one of the approaches that is
getting much more attention this this because
of its uhh more precise control as to what
can be done
In fact what we are talking about in gene
targeting or conditional knockout is that
you are able to create mutation but you know
the technology that is coming now is can you

Hindi: 
को क्रमिक पीढ़ी
में नहीं देख रहे
हैं, इसलिए आप उस रेखा
को भी ढीला कर देंगे
जो आपने बनाई है।
इसलिए यदि हम आपको
एक विशिष्ट ऊतक या
उत्परिवर्तन (mutation)
के बारे में बता सकते

Hindi: 
हैं जो केवल विकास
के बाद के चरण में
हो रहा है या जब आप
चाहते हैं कि तब आपको
सभी ऊतक (tissue) में जीन
(gene) कार्य को अलग करने
में मदद मिलती है
जो कि जीन (gene) विभिन्न

English: 
sort of correct an error that is there that
is resulting in a disease Right so if we can
fix that probably that individual can become
normal so therefore there are many other approaches
in the meantime people are trying to a engineer
the genome to either understand that disease
process or understand that gene function and
one of the promising approaches that is being
considered to be much more powerful than the
loxP system or global knockout is called as
genome editing all right using certain engineered
nucleases right So this is just this cartoon
gives you an overall view as to what it tip
It’s it has a wide applicability People
used return plant cell in fact it is started
uhh to begin with for the plants now it is
applying even to the human I will talk about
little latter So it is basically uhh what
you have is you have uhh engineered nuclease

English: 
uhh that can identify a given segment a small
region of the genome and then it can cut there
and then the around cellular machinery has
a repair mechanism Right if we have damage
in DNA or repair mechanism tries to uhh you
know fix that and it is disease in this it
is expected that our repair mechanism would
you know try to fix that damage cost by the
engineer nuclease in this process there may
be some changes that is happening
So there are two different process one called
as uhh NHEJ meaning non homologous end joining
and homologous recombination right So this
homologous recombination normally happens
in the you know in the mitotic cells whereas
the this process we believe it happens in
almost all the cells because even there there
could be damage and you know self-rise to
repair itself So what it does is that this
engineered nuclease will come to that little
later is what the nuclease is It is not something
which can go on cut anywhere it is like more

Hindi: 
विकास चरण में व्यक्त
करते हैं और इसी तरह
। तो यह वह जगह है
जहां आपको पता है
कि अगली पीढ़ी नॉकआउट
दृष्टिकोण (knockout approach)
है जिसे इस सशर्त
नॉकआउट (conditional knockout)
कहा जाता है जो वास्तव
में जीन (gene) के कार्य

Hindi: 
को अलग करने में हमारी
मदद करता है।
आइए देखें कि ग्लोबल
नाक्डाउन (global knockdown)
के बीच क्या अंतर
है जिसे हमने प्रतिबंधित
के रूप में चर्चा
की है जिसे आप सशर्त
नॉकआउट दृष्टिकोण
कहते हैं।
अंतर यह है कि आप कैसे
डीएनए वेक्टर (DNA vector)

English: 
like the restriction enzyme that discuss about
almost this is the same there it recognize
certain sequences right and then it goes and
makes double sided cut there
Just like restriction enzyme and so once you
made cut then our system in the it is whatever
we are talking about designing the live cell
uhh so you are not extracting the DNA outs
So you are using a cell and you are introducing
the nuclease and this will go and cut somewhere
and as a result you have DNA damage and our
system tries to repair in that process you
may delete some segment few bases that is
good enough for gene to be in activated So
if you have an enzyme which recognize certain
sequence and that such kind of sequence that
present over a gene or close to a gene which
is likely to disrupt the function you can
use this and it it makes the changes So this
is the uhh the principle are the basic uhh
concept behind this nuclease let see what
they are

English: 
So before we get into let us look into this
two process one is called to non-homologous
end joining process and homology directed
repair or recombination what we discussed
Basically this is what you are talking about
say suppose you have an enzyme which goes
and makes cut in your genome it could be a
single cut or it could be double cut depending
on how many sites are there in given segment
of the genome and then what happens in this
processes once the cut is made our cell including
human cells have the machinery to fix the
damage because you know our cells that expose
to various uhh stress and some of them can
caused DNA damage but immediately our system
make sure that you know damages are fixed
and and whatever you are talking about this
proteins are nothing but the proteins that
are involved in repair process
Let us not worry about what is name and what
is the specific function but there are two
ways by which it can function say suppose
you have a a single cut then what happen is

Hindi: 
को कैसेट बनाते हैं
जो विशेष जीन (gene) को
पीटने के लिए उपयोग
किया जाता है।
तो यहाँ अंतर जैसा
कि आप यहाँ देख सकते
हैं।
इसलिए आप वहां ग्लोबल
नाक्डाउन (global knockdown)

English: 
It tries to you know uhh polish the DNA bit
removes whatever it is and then tries to you
know seal the DNA In this process what happens
is that there could be few additional bases
added at the site of you know you are the
cut where it is made or it there could be
few bases that have deleted So it is a kind
of random process it can be substitution it
can be insertions it can be deletions
So as a result you know you are going to have
some change and some of them could affect
the way of the gene functions because it can
change the coding region so therefore the
protein is not made Your last so it is basically
altering the function of the gene but what
kind of changes will happen you do not have
any control You expect that you know that
would have some function of the gene which
is more likely to be The other process is
that you have selected the enzyme such that
are you have identified a gene with certain
you know sequence such that they you know
you have made two cuts so if you have two

Hindi: 
में देख सकते हैं
कि आप क्या करते हैं
कि आप जीन के फ़्लैंकिंग
क्षेत्र या जीन (gene)
के एक खंड को ले जाते
हैं जिसे आप बाधित
करना चाहते हैं, आप
नॉकआउट (knockout) करना
चाहते हैं।
तो यहां हम इस तरह
की सशर्त नॉकआउट

Hindi: 
(conditional knockout) में क्या
करते हैं, आप वास्तव
में नहीं हटाते हैं
कि आप उस सेगमेंट
को जानते हैं जो आप
चाहते हैं कि कैसेट
(cassette) में ही लक्षित
कैसेट में आपको हटा
दिया जाए, बल्कि आप
कुछ नई साइटों को
पेश करते हैं।

English: 
adjacent cuts close nearby then whatever the
fragment that is lost in between that is sort
of degraded
So what the cell tries to do is the chromosomal
DNA which is much larger now because small
part is last This two are joined together
now Interrupt in between whatever fragment
that was that is last So as result you are
going to have a mutation which is more like
deletion Say suppose a gene given exon say
its 2 kb and you have two sites you know which
is separated by 2kb fragment If you cut then
allow the system to repair You have lost the
two gap in between and you have sealed it
therefore the genes you know two exons or
one exons whatever is last
So that’s the way to do it The other is
more in mitotic cell is this homology directed
repair where basically this cell looks at
region that are sort of complementary you
know and then you are able to go on fix it
so for example you can you can have a construct

English: 
kind of where you have region that are homologous
then it can go and try to stich identify that
stich and so on So this a kind of a you can
create insertions using this method but this
is uhh you know you cannot use it in all the
cell type so depending on what you want do
So that’s that is the uhh concept behind
this whole thing
Let us look into what is this nuclease What
are this nuclease is people use for genome
editing First nuclease that that people start
using uhh was like restriction enzyme as we
said so we have uhh you know a domain which
is basically domain that is able to cleave
the DNA just like a restriction enzyme But
restriction enzyme are two domains one is
the nuclease domain which helps the DNA to
if the enzyme to the cut DNA then you have
the other domain which give the specificity
as to where the enzyme should go on cut like

Hindi: 
इसीलिए यहाँ पर हरे
रंग में दिखाया गया
है, आप इसे इसके दोनों
ओर देख सकते हैं।
तो ये एक्सोन (exon) एक,
दो और तीन हैं और फिर
आप हटाना चाहते हैं
यदि आपका उद्देश्य

English: 
as you have see restriction enzyme They have
a unique you know recognition sites the given
sites sequence are identified by enzyme and
it goes and cuts there
So here to it’s a same principle so you
have DNA binding which is the only difference
here is that the recognition sites are very
large like to be 14 basese16 bases therefore
the frequency of such sites in your genome
is very few right you know the probability
that that you would find that kind of combination
is very low and therefore it is not going
to if you have used smaller you know enzyme
that identify four base then it is going to
chop off your genome that not desirable because
it it does not allow the cell to cell bind
That here it is very few sites therefore you
are going to make a cuts in only a few sites
so that really helps right So where are the
enzyme the earliest enzyme people have used
is this enzyme called Fok1 and then of course
what they have done is They have deleted the
DNA binding domain of that particular protein
and then try to fuse it with some other you

Hindi: 
जीन (gene) के इन तीनों
एक्सॉन (exons) को हटाना
है, तो आप जानते हैं
कि आप जीन (gene) के कार्य
को समझते हैं क्योंकि
इसने अपना कार्य
खो दिया है जो आप करते
हैं।
जो भी क्षेत्र आप
इसके दोनों तरफ हटाना

English: 
know uhh DNA binding protein therefore you
made an engineered enzyme So by doing this
you can make this nuclease Fok1 to identify
whichever sequence that you want right or
you know you much more uhh you know control
over which segment it can go cut So let us
look into two such examples one is what is
called as a zinc finger nuclease right the
other one is called as transcription activator
like effector nuclease okay
ZFN is the abbreviation and tell this one
So let us see what it is both use the same
concept that you have a DNA binding domain
which gives a spite sites specificity and
then you have this nuclease domain which cuts
very close to the domain So often this enzyme
function is dimer because you have one right
and then you have the other one therefore
you know you can make two cuts and so on So
that is what shown here in figure for example

Hindi: 
चाहते हैं, आप अपने
छोटे अनुक्रम (sequence)
को जोड़ते हैं जिसे
loxP साइट्स कहा जाता
है।
तो आप साहित्य पर
जा सकते हैं और पाया
कि यह एक छोटा सा क्रम
क्या है और ये अनुक्रम
(sequence) हैं जो कि एक
पुनः संयोजक द्वारा
पहचाने जाते हैं
जो मूल रूप से जीवाणु
है और ये पुनः संयोजक
क्या करते हैं, इसे
बढ़ावा देता है जिसे
साइट-विशिष्ट (sites-specific)
पुनर्संयोजन (recombination)
कहा जाता है जब ऐसी
साइटें हैं, जिनके
बारे में आप जानते
हैं कि आप सेगमेंट
में जानते हैं, उसी
डीएनए (DNA) में सीआईएस
का अर्थ है जो पुनर्संयोजन
(recombination) इन साइटों
की पहचान करेगा और
इन दो साइटों के बीच
जो कुछ भी है वह इसे
हटा दिया जाएगा और
डीएनए (DNA) के टुकड़े
टुकड़े जिसे आप जानते
हैं कि अब हटा दिया
गया है जो उस क्षेत्र
में भर जाता है इसलिए,
जीनोम (genome) को बहाल
किया जाता है लेकिन
आप उस सेगमेंट (segment)
को खो देंगे।

English: 
it all started with the enzyme called Meganucleases
now that had limitation because it can cut
only such sequence wherever it is there right
Then they have engineered such in nuclease
with what is called zinc finger nuclease Here
the zinc finger is nothing but these are the
structural domains that are present in many
transcription factors
So you must have studied about transcription
factor These are set of proteins that goes
and identify certain sequence that are located
on the promote original of the gene So therefore
you can restrict which gene is turn on or
turn off Most often these are activator so
these proteins go on bind to such sequences
and then activate and more often such sequences
are present in repairing room to domain in
a two segments and they go as function as
a dimer and so on So what they have done is
they have used this DNA binding domain and

Hindi: 
इस साइट और इस साइट
के बीच उदाहरण के
लिए आप जानते हैं
कि जो कुछ भी इसके
बीच में है वह खो जाएगा
क्योंकि एक cre recombinase।
तो आपके पास इसे सशर्त
नॉकआउट (conditional knockout)
उत्पन्न करने के
लिए होना चाहिए, सबसे
पहले आप अपना लक्ष्यीकरण
वेक्टर बनाएं जिसमें
आप उस क्षेत्र पर
loxP साइटों को डाल सकते
हैं या पेश कर सकते
हैं जिसके साथ आप
जीन (gene) हटाना चाहते
हैं।
तो उदाहरण के लिए
यहाँ आपने कैसेट
में loxP साइटों को जोड़ा
है और फिर प्रक्रिया

English: 
the fused to uhh the nuclease domain such
that you know a theoretically you have these
segment identifying these sequences and then
you have this nuclease domain likewise you
have another molecule of the same protein
bind here and the nuclease domain it can make
a cut wherever you want
So it is not as simple what they have done
is they have created large in number of mutants
for these zinc finger binding domain and such
that they looked at what are the sequence
on which it can binding In fact they can you
know if you have a disease sequence then they
can engineer the enzymes such that you will
identify that sequence So what you have done
is You decide where do you want create the
mutation and then create DNA binding domain
which can bind to that sequence you know thats
the way now we can tell your enzyme to cut
wherever you want
So that kind of you know system is award there
are uhh you know now there commercial companies
which have specialized in making these enzymes
one of the Signal Reach so what they do is
that you give the sequence or they predict
what sequence in the region that you want

Hindi: 
समान है इसलिए आपने
भ्रूण स्टेम सेल
(mbryonic stem cells) के अंदर
इसे पेश किया है जो
आप एक सकारात्मक
चयन (positive selection) या नकारात्मक
चयन (negative selection) के लिए
जाते हैं और जानवर
वगैरह बनाते हैं।
लेकिन जब तक इस जीन
(gene) में उदाहरण के
लिए लसिका स्थल होते
हैं, तब तक यह दिखाया

Hindi: 
जाता है कि ये बहुत
छोटे अनुक्रम (sequence)
हैं जो आमतौर पर जीन
(gene) के कार्य को प्रभावित
नहीं करते हैं।
तो दूसरे शब्दों
में, भले ही आपने loxP
साइटों को पेश किया
हो और जीन (gene) क्रियाशील
हो, क्योंकि यह वहाँ
के इंट्रॉन में साइटें

English: 
to delete and then they engineer the protein
such that it will identify the sequence There
is a you know laborious process involved in
it The other one is very similar to zinc finger
domain but they have used uhh in enzyme uhh
again not enzyme sorry its transcription factor
which are normally made by the pathogen that
are infecting plants So these are the pathogen
that you like our virus and others they come
and get into your system and then hijack your
system For example virus can get into your
cell and then hijack use the same machinery
transcription translation to make their own
protein
The same way these are the protein that that
all made by the pathogen but now hijack the
system so they have used these you know uhh
the gene that code for these proteins That
are transcription activators to engineer genome
mainly the plant genome for example what is
shown here is the plant genome So again the
concept is very similar you have your DNA

Hindi: 
हो सकती हैं, इसलिए
जब वे RNA को अपना विभाजन
बनाया जा रहा है या
यह वास्तव में फ़ंक्शन
को प्रभावित नहीं
करता है।
इसलिए एक जानवर बनाकर
जिसके पास जीन सेगमेंट
(gene segment) के दोनों ओर
ये लक्सपॉप (loxp) साइट
(site) हैं जिसे आप हटाना
चाहते हैं, यह जानवर
सामान्य है क्योंकि
यह सामान्य रूप से
कार्यात्मक है इसलिए
आप जीन (gene) को हटा देंगे
क्योंकि यह सिस्टम
की सुंदरता है।

English: 
binding domain fused to the nuclease domain
and you can engineer such that whichever sequence
that you want now we will able to cleave over
then
So the basically you make this protein and
then deliver so you make the protein to get
in the cell and express there right and then
once the protein is there is going to cleave
that a region of the DNA and you know if such
kind of cuts are made then cell tries to repair
in this process as we discussed little earlier
There may be lost There may be gain There
can be alteration as result the function of
the gene is lost right And then he allow the
plants to grow and look at decide phenotype
in case of plants in case of animals are cell
lines likewise we can do that You know you
can go for for example the embryonic stem
cells you can introduce these nuclease there
something is happening you you know look at
the cell whether desired change is happen
If it is happen then go on create the animal
so it is going to have such kind of changes

Hindi: 
तो आप यह शर्त रख सकते
हैं कि आप केवल ठीक
ऊतक या किसी विशेष
विकासात्मक चरण में
होने वाली विलोपन
को सीमित कर सकते
हैं, जैसा कि आप ठीक
चाहते हैं।
तो ऐसा होने के लिए
आपके पास प्रोटीन
होना चाहिए जिसे
आपने cre recombinase कहा है,
ठीक है, जैसा कि मैंने
आपको बताया है कि
ये जीवाणु मूल हैं
इसलिए इसे सामान्य
रूप से माउस और चूहे
में व्यक्त नहीं
किया जाता है और जो
भी जीव कम से कम आपको
पैदा करने की कोशिश
कर रहे हैं सशर्त
उत्परिवर्ती (conditional
mutant)।

English: 
So this is another robust method because you
are not really looking at all those construct
that we discussed So the time spending making
constructs you know you no longer we have
to do You can engineer the nuclease then introduce
into the cell it will do rest of the things
So it becomes much more easier and more efficient
as compare to the knockout that we have discussed
but again this is global thing so it is not
a conditional right so that’s let us see
another process but the more recent development
in genome editing is this what is called is
CRISPR cas9 mediator genome modifications
and these is come up in huge way because it
uses very different kind of things
So in fact you can now you know the previous
the tools that ZFN and the other one that
we spoke about so there you are depend on
a protein whose binding domain detects as

English: 
to where the cut can happen so you know you
have to think of certain sequence on to which
you know you know your protein goes and binds
and there could be complication that time
because the sequence could be such that you
know you are unable to get the DNA binding
domain for that particular sequence The complexity
makes it of the genome where do you want to
mutate cannot times limit your efficiency
with which you are able to generate such mutants
of DNA binding domain So you may not be able
to get them so that is the limitation because
you have to screen large number mutant that
times it does not work out
So this CRISPR cas9 really does not bother
about such DNA binding domain right so before
you get into let us see what is these system
is and from where we evolved such kind engineered
nucleases So basically just like we have immune
system in our body where we have you know
cells that fight against any foreign you know
bacterial my virus that gets in the bacteria

Hindi: 
इसलिए आपको जिस चीज
की आवश्यकता है, वह
है ट्रांसजेनिक (transgenic)
जानवर का अर्थ है
एक जानवर जो आपके
विदेशी जीन को व्यक्त
कर रहा है इसलिए यह
प्रोटीन है जो इस
मामले में आवश्यक
है यह एक ट्रांसजेनिक
(transgenic) जानवर है जो
क्रे रेकोमिनेज़
(cre recombinase) को व्यक्त
करता है।
तो यह वही है जो यहां
दिखाया गया है, इसलिए
अब आप किस ट्रांसजेन
(transgene) का उपयोग करेंगे
या आप किस ट्रांसजेनिक
लाइन (transgenic line) का उपयोग
करेंगे?
यह सब आपकी योजना
पर निर्भर करता है
जैसे आप जीन (gene) को
कहां हटाना चाहते

Hindi: 
हैं, उदाहरण के लिए
आपने यहां जो दिखाया
है वह एक cre recombinase है
यह cre recombinase का कोडिंग
अनुक्रम (coding sequence) है
और आप जानते हैं कि
आप जीन के प्रमोटर
को उस कोडिंग अनुक्रम
(coding sequence) को लिंक करते
हैं जो सामान्यतः
एस्ट्रोसाइट्स (astrocytes)
में व्यक्त किया
जाता है।
ये सेल के एक विशेष
समूह हैं जो केवल
केंद्रीय तंत्रिका
तंत्र (central nervous system) में
मौजूद हैं।
मस्तिष्क में कहें
कि ये न्यूरॉन्स
नहीं हैं ये गैर-न्यूरोनल
ऊतक हैं लेकिन तंत्रिका
तंत्र तक सीमित हैं।
अब इसके बारे में
यह अनोखा है कि जब
से हम जानते हैं कि
आप इन cre recombinase कोडिंग
अनुक्रम (coding sequence) को
एक जीन के प्रमोटर
के तहत ड्राइविंग
करते हैं, जिसे सामान्यतः
astrocytes में व्यक्त किया
जाता है, तो अगर आपको
पता है कि cre recombinase सेल
में केवल उन कोशिकाओं
में व्यक्त होता
है, जहां आपकी दस्तक
होती है।
या नॉक आउट हो जाएगा।
उदाहरण के लिए, जब
आप इन दो जानवरों
को पार करते हैं, तो
उस जानवर के पास जो
कि पुनः संयोजक होता
है, जब आप इन हाइब्रिड
(hybrid) को प्राप्त करते
हैं, जो इन दोनों जानवरों
को मिला है, तो आप
इस विभेदित कोशिकाओं
को एस्ट्रोसाइट्स
(astrocytes) में जानते हैं।
आपके पास cre recombinase होगा
इसलिए नॉकआउट या

English: 
also has a immune system and these cas9 is
one such system which prevents the entry of
for example any foreign DNA bacterial fights
for example because this is they infect that
bacterium and and they or some other viruses
can introduced the DNA
So they want to be immune uhh and identify
such DNA and remove them right So this is
pretty much that’s that’s the mechanism
that it uses this called as clustered regularly
interspaced short palindromic repeat Pretty
long sequence but what it says is this you
have segments in the genome are the bacterium
in which there are palindromic sequences The
palindromic that you have for example abcd
this is the sequence and then it would be
reversed for example cba right that’s the
parameter right now such kind of short sequence

English: 
palindromic sequence are clustered meaning
present close to each other but these are
enter space meaning they are not continuous
but there are other sequence in between
Such sequence really help in you know fight
against the So therefore it is called as you
know abbreviation of this cluster regularly
interspaced short palindromic repeats called
CRISPR and then you have you know genes that
are associated with these cluster right CRISPR
associated therefore they called as cas9 right
So whatever cas genes that’s what it is
So how does it work so you have what is shown
here is the bacterial genome and then you
have these cas9 gene and then close to that
you have this you know the clusters right
and and the idea is that in the wherever you
have this uhh the clusters then RNA is produced
and then RNA really helps as a surveillance
goes and looks for any foreign DNA if it is
then it it gets degrade How does it do that

Hindi: 
जीन (gene) केवल इन कोशिकाओं
में हटा दिया जाएगा।
उदाहरण के लिए अन्य
ऊतक में, पाचन तंत्र
(digestive system) या यहां तक
कि न्यूरॉन (neuron) या
विकास के दौरान यह
जीन बिल्कुल सामान्य

Hindi: 
के लिए होता है इसलिए
आपको कोई भी ज्ञात
दोष नहीं दिखता है।
इसलिए जो कुछ भी आप
अब देखने जा रहे हैं,
वह एस्ट्रोसाइट्स
(astrocytes) में जीन (gene) के
खो जाने के कारण है,
जिस आत्मविश्वास

English: 
So as in when your foreign DNA comes in because
of an infection what happens is that these
system really takes part of the DNA and and
sort of integrates as spot another bacterial
genome around these clusters Okay it puts
that just like your immune cells if there
are any foreign body get in it you know you
your immunes cells attacks them digest the
protein and presence part of this protein
your image complex right therefore the system
is alerted as to these are the peptide that
possibly are present as foreign invader exactly
the same and then this cluster is activated
therefore the transcripts are made the transcripts
are such that you have this you know uhh fragments
along with the foreign DNA sequence
So what happens is this RNA goes and looks
for homology and wherever you have a DNA which

English: 
is homologous to just that has got incorporated
now it is go into you know degrade that you
know cut that DNA and and that try to degrade
this is what this how it is done So in in
other words you are going to cut a DNA whose
sequence matches the RNA that cas9 gene regulates
right This is this is basically uhh or this
this CRISPR locker regu regulates so like
what you shown here so we have a primary transcripts
right which are made and then they have this
region and this is what called as crRNA and
if wherever it finds homology and its going
to cut okay So this have it is So this is
to protect against any invader that comes
into the bacteria
So let us see how we have engineered that
you know complex a mechanism to our own advantage
therefore we can edit our genome the way we
wanted So there are two ways by which we can
do uhh this is the first one that have shown
on the left side is genome engineering it

Hindi: 
के साथ आप कह सकते
हैं कि।
अब मान लीजिए कि इस
जीन को आंत में भी
व्यक्त किया जाता
है, उदाहरण के लिए

Hindi: 
आप जिस भी जीन को हटाना
चाहते हैं, आप आंत
में जीन (gene) के कार्य
का परीक्षण कैसे
करेंगे, इसलिए फिर
से आपके पास एक ट्रांसजेनिक
(transgenic) जानवर होना
चाहिए जिसमें cre recombase
व्यक्त कर रहा है
आप आंत में मौजूद
कोशिकाओं को जानते
हैं।

English: 
cas9 nuclease again it is a you know a nuclease
because it cuts the DNA what’s the different
between this and the ZFN nuclease that we
have discussed earlier So over there the nuclease
is dependent on a DNA binding domain to identify
a sequence where it has to cut here the nuclease
is dependent on the RNA that comes along is
the system therefore the RNA would look for
homology for that particular RNA sequence
wherever in the genome you have its going
to cut it
This is the RNA that is shown here and what
you can do is we can engineer the RNA such
that you put a small segment of the sequence
which is complement it to the genome where
do you want make them cut okay So if you make
the cas9 complex along with RNA which is called
is that guide RNA because it really helps
the nuclease to go on home where it should
cut so now you if you wants for example gene
X I want cut so I take part of that sequence

Hindi: 
इसलिए यदि आप ऐसा
करते हैं कि आप जीन
आंत (gene intestine) या वृषण
(testis) या अंडाशय (ovary)
में या फेफड़ों (lung)
में जा रहे हैं।
तो यह सब अब निर्भर
करता है एक बार जब
आप एक सशर्त नॉकआउट
(conditional knockout) जानवर बना
लेते हैं, जिसमें
loxP साइटों को डाला

English: 
that is in a critical region of gene X and
make that RNA then is going to go and position
the nuclease around gene X right So then it
can of course the nuclease it makes the double
strand cut exactly the same way that you made
and then allow the same mechanism so your
cell is able to repair either by you know
the non-homologous end joining or the other
homology directed repair so in this process
either you can delete a region or you can
put in a new sequence like you know insertion
so the same approach that we discussed earlier
This is just to either delete or create mutation
or to introduce a small segment into the genome
but you can also the just like the way we
discussed in this other two nucleases which
has got DNA binding domain you can also engineer
such that you have two complex that of the

English: 
cas9 which sit close to each other you know
segment of the genome because we can design
the guide RNA such that it falls very close
to each other of the genome and then what
happens it cuts these are mutants of these
cas9 uhh which are called as it does not make
a double stranded cut but it just you cut
one strand of the DNA right these are mutants
that are derived
As a result what happens now again your system
price to you know because of the nics that
are created intervening sequence will not
last then you can again put a new homology
director repair mechanism it can it can help
you to integrate your foreign DNA because
it pretty much looks for the homology so it
would only put the DNA where such nics are
made So it gets in and you can create the
kind of sequence so for example you want to
fix a repair you know fix a error in DNA there
was mutation and you want to rectify the mutation

Hindi: 
जाता है और जीन के
दोनों ओर अब यह सब
आप पर निर्भर करता
है जिसके साथ आप ट्रांसजेनिक
(transgenic) जानवर को जानते
हैं जो कि क्रॉस रिकॉम्बिनेज़
को व्यक्त करते हैं
जो आप पार कर रहे हैं।
तो आप चुन सकते हैं
कि आप ट्रांसजेनिक
(transgenic) जानवर को जानते
हैं, जो क्रे रेकोम्बिनेज़
(cre recombinase) को व्यक्त
करते हैं और फिर वांछित
सेल जिसे आप हटा सकते
हैं, ताकि आप सशर्त
नॉकआउट (conditional knockout)
को जानते हैं।
तो उदाहरण के लिए
यहाँ क्या होता है
जब आपके पास cre recombinase
होता है, तो जाकर LoxP
साइटों की पहचान
करते हैं और फिर जो
साइट विशिष्ट पुनर्संयोजन
के रूप में कहा जाता
है उसे पेश करते हैं।
तो इस मामले में क्या
होता है वह रिकॉम्बिनेज़
(recombinase) है जिसे आप जानते
हैं कि यह आपका डीएनए

English: 
put back into the while type so you can use
these approach and therefore you know these
new DNA can go on for fix this So this is
doable in this process you can correct the
error right
So this CRISPR cas9 has become so powerful
there ten within few years of you know introducing
the system you will find that its application
these one are the paper that came over two
years back which talks about right from human
source to we can see that there are few examples
here human cells to mouse rat rabbit frog
zebra fish and what not from plants to bacteria
to yeast you know you are able to edit the
genome the way you want So it is very very
you know robust technique and wide applicability
and and all you need is your sequence of the
genome because you want to create guide RNA
that is good enough So in since now we have

Hindi: 
(DNA) है और आपके पास
LoxP साइट्स हैं यहाँ
cre recombinase वास्तव में
इन दोनों साइटों
को एक साथ लाने में
मदद करता है, यह कुछ
इस तरह से कर सकता
है।
तो आप इस साइट को एक
साथ लेकर आए हैं और
रीकॉम्बिनेज़ (recombinase)
यहाँ बैठता है और
मूल रूप से यहाँ और
यहाँ पर डीएनए (DNA)
को काटता है इसलिए,
आपके पास रैखिक डीएनए
(DNA) है जिसमें पुनः
संयोजक LoxP साइटों
पर बिल्कुल कट जाता
है और पेश किया जाता
है, तब आपके पास एक
गोलाकार डीएनए (DNA)
होगा पुनर्संयोजन
साइट इन LoxP साइटों
लेकिन यह बच नहीं
होगा क्योंकि आवेदन
या जीन (gene) के लिए नहीं
जा रहा है telomere नहीं
जा रहा है, यह सेंट्रोमियर
(centromere) नहीं जा रहा
है तो कुछ के भीतर
आप जानते हैं कि यह
खो जाएगा विभाजन
यह कार्यात्मक नहीं
है - यह है आपके क्रोमोसोमल
डीएनए (chromosomal DNA) का हिस्सा।
लेकिन जो भी डीएनए
तत्व (DNA element) उस जीन
(gene) का हिस्सा था, जो
बीच में मौजूद था,
उसे हटा दिया गया
है, इस तरह से आप उस
जीन (gene) को डिलीट करने
में सक्षम होते हैं,
जिसे आप रीकॉम्बिनेज़
को ड्राइव करके जानते
हैं कि आप यह करना
चाहते हैं।
वास्तव में, तकनीक
इतनी मजबूत है कि
अब आप उन दिनों को
जान सकते हैं जब आप
जीन (gene) को हटाना चाहते
हैं।
उदाहरण के लिए, ऐसी
दवाएं हैं जो तब उपलब्ध
होती हैं जब आप जानवर
को दवा खिलाते हैं,
एक दिया हुआ जीन चालू
हो सकता है।
तो यह मान लें कि आप
जानते हैं कि क्रेक
पुनः संयोजक एक प्रमोटर
(promoter) के अधीन होता
है, जिसे आप जानते
हैं कि आप किसकी अभिव्यक्ति
से धुन निकाल सकते
हैं, आप जानते हैं
कि आप जानवर को क्या
खिला रहे हैं।
तो इस तरह से आप इच्छा
कर सकते हैं कि कब

English: 
discussed there are so many uhh species whose
you know DNA has been sequence It is much
easier for us to really do such kind of editing
so it really helps
So it is not only restricted to the the you
know the cell lines are animals in fact very
recently last month in November 2016 the first
attempt to fix mutation leading to your particular
kind of cancer in this case it is lung cancer
in a human case was sort of approved a Chinese
group really used to this approach The approach
is to take the cells from the human body and
fix the error and put back the cell therefore
you know you are able to control this so we
need to wait and see how good this approach
is but it the promise is uhh you know is enormous
and people are thinking that if really works
have and if it has the kind of specificity
that we are talking about you should be able
to fix the genome they may be want and it

Hindi: 
आप क्रे रेकोम्बिनेज़
(cre recombinase) को प्रेरित
कर सकते हैं और आप
जीन को बंद कर सकते
हैं।
तो यह एक शक्तिशाली
तकनीक (powerful technique) है
और लोग अब उम्र बढ़ने
की प्रक्रिया के
दौरान उदाहरण के
लिए समझने की कोशिश
कर रहे हैं या एक अच्छा
रोग मॉडल जिसे आप
जानते हैं कि क्या
आप जानते हैं कि आप
कुछ चिकित्सीय दृष्टिकोण
(therapeutic approach) में लाने
में सक्षम होंगे,
इस तरह के जानवरों
का निर्माण करके
इनका परीक्षण किया
जा रहा है।
तो यह एक बहुत शक्तिशाली
उपकरण है।
इसलिए मैं आपको एक
ऐसा उदाहरण दूंगा
जहां आप जानते हैं
कि ऐसी प्रगति हैं
जो वास्तव में इस
तरह के सशर्त नॉकआउट
मॉडल (conditional knockout models)
का उपयोग करके मानव
रोग को समझने में
हमारी मदद करती हैं।
उदाहरण के लिए एक
बहुत ही सामान्य
न्यूरोलॉजिकल विकारों
(neurological disorders) में से
एक को Rett सिंड्रोम
(syndrome) के रूप में जाना
जाता है।
Rett सिंड्रोम (syndrome) आप
एक मानव में जानते
हैं यह मानसिक मंदता
है और यह ज्ञात है
कि यह आप एक्स-लिंक्ड
(X-linked) और इतने पर जानते
हैं लेकिन क्या आश्चर्यजनक
है कि कई पुरुष रोगी
नहीं हैं जो कि Rett
सिंड्रोम के लिए
जाने जाते थे।
तो सिद्धांत थे कि
या तो यह है कि वे
जीवित नहीं हैं या
यह पुरुष को इसके
बहुत ही माइल्ड फेनोटाइप
(milder phenotype) को प्रभावित
नहीं करता है और इसी
तरह जब उन्होंने
इस रेट्ट सिंड्रोम
(Rett syndrome) के लिए जीन
(gene) की पहचान की तो
उन्हें जो पता चला
वह बहुत आश्चर्यजनक
था क्योंकि जीन उत्परिवर्तित
और रेट्ट सिंड्रोम
फेनोटाइप(Rett syndrome phenotype)
के लिए अग्रणी है
यह प्रोटीन है जो
वास्तव में विभिन्न
प्रकार की कोशिकाओं
में व्यक्त किया
जाता है, यह सर्वव्यापी
है इसका अर्थ है कि
यह प्रत्येक कोशिका
प्रकार में व्यक्त
किया गया है जिसके
बारे में आप सोच सकते
हैं और दूसरे में
कम से कम यह एक बहुत
ही सामान्य कार्य
है।
कार्यात्मक दृष्टिकोण
से क्योंकि यह एक
प्रोटीन है जो जाता
है और जीनोम (genome) में
क्षेत्रों को बांधता
है जो मिथाइललेटेड
साइटोसिन बेस (methylated
cytosine bases) होते हैं जिन्हें
CpG द्वीप (islands) कहा जाता
है जो सामान्य रूप
से कई जीनों (genes) के
प्रमोटर क्षेत्र
(promoter region) में मौजूद
होते हैं जब साइटोसिन
(cytosine) ऐसे CpG फॉस में
होता है।
पी फॉस्फेट के लिए
खड़ा है।
जब आपके पास इस तरह
की मेथिलिकेशन (methylation)
होती है, तो अधिक बार
इन जीनों का मजाक
उड़ाया जाता है, आप
जानते हैं कि यह किस
तरह का मौन है, इसे
व्यक्त नहीं करना
चाहिए।
तो यह ट्रांसक्रिप्शनल
फैक्टर (transcriptional factor)
माना जाता है जो इस
तरह के अनुक्रम (sequence)

Hindi: 
की पहचान करता है
और जीन अभिव्यक्ति
को संशोधित करता
है और विभिन्न प्रकार
के ऊतकों में व्यक्त
किया जाता है और सभी
ऊतक ऊतक प्रकारों
में CpG मिथाइलेशन
(methylation) को जाना जाता
है।
इसलिए वे कभी भी आश्चर्यचकित
नहीं हुए जब उन्होंने
पाया कि यह जीन है
जो रेट्ट सिंड्रोम
(Rett syndrome) का कारण बन
रहा है क्योंकि यह
विशुद्ध रूप से एक
न्यूरोलॉजिकल फेनोटाइप
(eneurological phenotype) है।
मेरा मतलब है कि अन्यथा
आपको कोई समस्या
नहीं है सिवाय इसके
कि ये बच्चे मानसिक
रूप से मंद हैं, उनका
आईक्यू (IQ) स्तर बहुत
कम है और इसी तरह।
तो यह आश्चर्य की
बात थी, तो वे वास्तव
में यह नापसंद करना
चाहेंगे कि यह जीन
(gene) एक न्यूरोलॉजिकल
फेनोटाइप (neurological phenotype)
कैसे पैदा कर सकता
है, हालांकि जीन (gene)
को विभिन्न प्रकार
के ऊतकों में व्यक्त
किया जाता है।
यह तंत्रिका तंत्र
में न्यूरॉन में
व्यक्त किया जाता
है।
यह तंत्रिका तंत्र
में गैर-न्यूरोनल
कोशिकाओं (non-neuronal cells)
में भी व्यक्त होता
है और इससे पहले एक
अध्ययन किया गया
था कि वे माउस में
आप में जीन को पीट
रहे थे और तब भ्रूण
(embryo) जीवित नहीं था,
यहां तक कि आप भ्रूण
(embryo) के विकास के लिए
नहीं जानते थे कि
यह विशेष जीन (gene) था
आप जानते हैं कि बहुत
आवश्यक माना जाता
है।
इसलिए वे आगे बढ़े
और इस विशेष मॉडल
सशर्त मॉडल का उपयोग
किया, जिसमें उन्होंने
जीन (gene) के एक प्रमोटर
(promoter) के तहत cre recombinase
को संचालित किया
है जो सामान्य रूप
से एक विभेदित न्यूरॉन
ओके (differentiated neuron okay) में
व्यक्त किया जाता
है।
इसलिए, एक बार जब आप
जानते हैं कि जानवर
है तो आप बड़े हो गए
हैं और एक विभेदित
न्यूरॉन्स (neurons) जानते
हैं और आपके पास cre
recombinase नहीं होगा, लेकिन
एक न्यूरॉन पल भर
में cre recombinase व्यक्त
करेगा क्योंकि यह
एक जीन (gene) के नियंत्रण
में है जो है सामान्य
रूप से विभेदित न्यूरॉन
(neuron) में व्यक्त किया
जाता है।
तो अब पुनः संयोजक
जाएगा और विलोपन
का परिचय देगा क्योंकि
अन्यथा एक loxP साइटें
सामान्य होती हैं
यह जीन (gene) को कार्य
करने की अनुमति देती
है लेकिन एक बार जब
आपके पास cre recombinase होता
है तो यह डीएनए (DNA)
के खंड को हटाने में
परिणाम की तरह होता
है जो दो loxP के बीच
होता है इन न्यूरॉन्स
(neurons) के परिणामस्वरूप
साइटों ने अब इस विशेष
प्रोटीन को खो दिया
और फिर उन्होंने
माउस में जीन (gene) के
फेनोटाइप (phenotype) को
देखा।
वे समझ गए हैं कि ऐसी
स्थिति में क्या
गलत होता है इसलिए
आपके पास एक मानसिक
मंदता है फेनोटाइप
(phenotype) और अब वास्तव
में इस पशु मॉडल का
उपयोग आपके लिए दवा

English: 
could be a powerful potential this particular
approach is called
So that’s a you know uhh that’s that is
sort of brings an end to uhh this lecture
and then we will see the rest of the technology
that help us in editing the genome in our
next lecture

Hindi: 
की जांच करने के लिए
किया जा रहा है और
बहुत सुंदर हैं आप
अध्ययनों को जानते
हैं जिन्हें हमने
दवा के अणु (molecule) की
पहचान की है जो निम्न
हैं क्लिनिकल ट्रायल
(clinical trial) के अधीन हैं
ताकि वास्तव में
इस बारे में बात हो
सके कि रोग प्रक्रिया
को समझने में इस तरह
के दृष्टिकोण कितने
शक्तिशाली हैं और
मानव के लिए इसका
अनुवाद किया जा सकता
है।
तो आप यहां देख सकते
हैं कि अब हम मस्तिष्क
के वजन के बारे में
क्या बात कर रहे हैं
क्योंकि आप जानते
हैं कि आपने अक्सर
देखा होगा कि शिशु
का जन्म एक शारीरिक
परीक्षा में होता
है जो सामान्य तौर
पर हर छह महीने में
सिर के आकार में देखने
के लिए किया जाता
है।
तो सिर परिधि वे आम
तौर पर मापते हैं
क्योंकि यह एक संकेतक
है कि क्या बच्चा
सामान्य रूप से बढ़
रहा है या नहीं।
आम तौर पर रोगी कि
उनके बच्चे जो कि
न्यूरोलॉजिकल फेनोटाइप
(neurological phenotype) से पीड़ित
हैं, परिधि आप सामान्य
आबादी में जो देखते
हैं, उससे कुछ कम या
कम जान सकते हैं।
तो यह एक ऐसा अध्ययन
है जो वास्तव में
विच्छेदित है और
दिखाया गया है कि
आप जानते हैं कि जब
आप इस प्रोटीन को
केवल न्यूरॉन (neuron)
में खो देते हैं तो
अब आपके पास एक लक्षण
है जो कि मानव स्थिति
में आपको दिखाई देने
वाले लक्षणों के
समान है।
ताकि आपको पता हो
अन्यथा आप जानते
हैं कि आप इसका अध्ययन
करने में असमर्थ
हैं क्योंकि आपके
पास हर कोशिका में
भ्रूण (embryo) होता है
जिससे आपकी मृत्यु
हो जाती है क्योंकि
आप वयस्कों में अध्ययन
करने के लिए एक मॉडल
नहीं रखते हैं इसलिए
यह वास्तव में हमारी
मदद करता है।
तो इसी तरह कई अध्ययनों
से लोगों ने प्रोटीन
के कार्य को समझने
के लिए इस मॉडल का
उपयोग किया है।
अब यह एक मॉडल है,
लेकिन आपको जो समझने
की आवश्यकता है वह
यह है कि एक क्षणिक
बनाना जिसे आप जानते
हैं कि नॉकआउट निर्माण
(knockout construct) एक बहुत ही
थकाऊ प्रक्रिया है
क्योंकि आप जानते
हैं कि इसके लिए जीनोम
(genome) में हेरफेर करने
और एक निर्माण और
चीजों की आवश्यकता
होती है जैसे उस।
तो यह वास्तव में
आप जानते हैं कि समय
लगता है और शायद यह
मॉडल के मामले में
काफी अच्छा है जहां
आप जीनोम अनुक्रम
(genome sequence) में सक्षम
हैं, तो आप जीनोम (genome)
को जानते हैं जिसे
आप सभी जीनों के संरचनात्मक
के रूप में जानते
हैं और इसी तरह, लेकिन
यह नहीं है सार्वभौमिक
की तरह आप सब कुछ के
लिए आवेदन कर सकते
हैं।
इसकी अपनी सीमाएँ
हैं।
इसलिए समानांतर में
कई अन्य दृष्टिकोण
हैं जिन्हें आज़माया
जा रहा है।
अब इन तरीकों में
से एक है जो इन दिनों
अपने अधिक सटीक नियंत्रण
की वजह से अधिक ध्यान

Hindi: 
आकर्षित कर रहा है
क्योंकि क्या किया
जा सकता है।
वास्तव में हम जो
जीन टारगेटिंग (gene
targeting) या सशर्त नॉकआउट
(conditional knockout) के बारे
में बात कर रहे हैं,
वह यह है कि आप एक
उत्परिवर्तन पैदा
करने में सक्षम हैं,
लेकिन आप जानते हैं
कि अब जो तकनीक आ रही
है, क्या आप किसी त्रुटि
को ठीक कर सकते हैं
जो कि एक बीमारी है।
ठीक है अगर हम यह तय
कर सकते हैं कि संभवतः
व्यक्ति सामान्य
हो सकता है इसलिए,
इस बीच कई अन्य दृष्टिकोण
हैं जो लोग एक इंजीनियर
को जीनोम (genome) की कोशिश
कर रहे हैं कि या तो
उस रोग प्रक्रिया
को समझें या समझें
कि जीन फ़ंक्शन और
आशाजनक दृष्टिकोणों
में से एक है इसे लक्सप
सिस्टम (loxP system) की तुलना
में बहुत अधिक शक्तिशाली
माना जा रहा है या
ग्लोबल नॉकआउट (global
knockout) को जीनोम एडिटिंग
(genome editing) कहा जाता है।
तो यह सिर्फ यह कार्टून
आपको एक समग्र दृष्टिकोण
देता है कि यह क्या
है।
यह एक व्यापक प्रयोज्यता
(wide applicability) है।
लोग इसे प्लांट सेल
में इस्तेमाल करते
हैं, यह पौधों के लिए
शुरू करने के लिए
शुरू किया गया है
अब यह मानव के लिए
भी लागू हो रहा है
मैं थोड़ा बाद के
बारे में बात करूंगा।
तो यह मूल रूप से आपके
पास है क्या आप इंजीनियर
nuclease कि एक दिए गए खंड
जीनोम (genome) के एक छोटे
से क्षेत्र की पहचान
कर सकते हैं और फिर
यह वहाँ कटौती कर
सकते हैं और फिर हमारे
अपने सेलुलर मशीनरी
(cellular machinery) की ठीक करना
है।
अगर हमें डीएनए (DNA)
में कोई क्षति होती
है या मरम्मत तंत्र
(repair mechanism) आपको ठीक
करने की कोशिश करता
है, और यह वांछित है,
तो यह उम्मीद की जाती
है कि हमारे मरम्मत
तंत्र (repair mechanism) को
पता चल जाएगा कि आप
इस प्रक्रिया में
इंजीनियर न्यूक्लियस
(engineerd nuclease) के कारण हुए
नुकसान को ठीक करने
की कोशिश करेंगे।
जो बदलाव हो रहा है।
तो दो अलग-अलग प्रक्रियाएं
हैं जिन्हें एनएचजे
(NHEJ) कहा जाता है जिसका
अर्थ है गैर-घरेलू
अंत में शामिल होना
और समरूप पुनर्संयोजन
अधिकार (homologous recombination
right)।
तो यह समरूप पुनर्संयोजन
(homologous recombination) सामान्य
रूप से आप में होता
है जो मेयोटिक कोशिकाओं
(meiotic cells) में पता है,
जबकि इस प्रक्रिया
का मानना है कि यह
लगभग सभी कोशिकाओं
में होता है क्योंकि
यहां तक कि नुकसान
भी हो सकता है और आपको
पता है कि सेल स्वयं
को ठीक करने की कोशिश
करता है।
तो यह क्या करता है
कि यह इंजीनियर न्यूक्लियस
(engineered nuclease) उस थोड़े
समय बाद आएगा कि न्यूक्लीज
(nuclease) क्या है?
यह कुछ ऐसा नहीं है
जो कहीं भी कट सकता
है, यह प्रतिबंध एंजाइम
की तरह अधिक है कि
हम लगभग इस बारे में
चर्चा करते हैं कि
यह वही है जो कुछ अनुक्रमों
(sequence) को सही पहचानता

Hindi: 
है और फिर यह जाता
है और वहां डबल फंसे
हुए कटौती करता है।
बस प्रतिबंध एंजाइम
(enzyme) की तरह और इसलिए
एक बार जब आपने एक
कट लगाया तो उसमें
हमारा सिस्टम जो
भी हम बात कर रहे हैं
वह लाइव सेल हो रहा
है इसलिए आप डीएनए
(DNA) को बाहर नहीं निकाल
रहे हैं।
तो तुम हो एक सेल का
उपयोग कर रहे हैं
और आप न्यूक्लीज
(nuclease) की शुरुआत कर
रहे हैं और यह कहीं
जाकर कट जाएगा और
परिणामस्वरूप आपको
डीएनए (DNA) की क्षति
होती है और हमारा
सिस्टम उस प्रक्रिया
को सुधारने की कोशिश
करता है जिससे आप
कुछ सेगमेंट को हटा
सकते हैं कुछ बेस
जो कि जीन (gene) के लिए
काफी अच्छा है निष्क्रिय।
इसलिए यदि आपके पास
एक एंजाइम (enzyme) है
जो कुछ अनुक्रम (sequence)
को पहचानता है और
इस तरह का अनुक्रम
(sequence) जो जीन (gene) पर
मौजूद है या एक जीन
(gene) के करीब है जो आपके
द्वारा उपयोग किए
जाने वाले फ़ंक्शन
को बाधित करने की
संभावना है और यह
परिवर्तन करता है।
तो यह सिद्धांत है
इन nucleases के पीछे मूल
अवधारणा है, आइए देखें
कि वे क्या हैं।
तो इससे पहले कि हम
इस दो प्रक्रिया
पर ध्यान दें, एक को
नान-हमालगस (non-homologous)
अंत प्रक्रिया में
शामिल होने के लिए
बुलाया जाता है और
होमोलोगी (homology) ने
ठीक करने या पुनर्संयोजन
(recombination) का निर्देश
दिया, जिस पर हमने
चर्चा की।
मूल रूप से यह वही
है जिसके बारे में
आप कह रहे हैं कि मान
लीजिए कि आपके पास
एक एंजाइम (enzyme) है
जो जाता है और आपके
जीनोम (genome) में कटौती
करता है, यह एक ही
कट हो सकता है या यह
जीन (gene) के दिए गए सेगमेंट
(segment) में कितने साइटों
के आधार पर डबल कट
हो सकता है और फिर
इस प्रक्रिया में
क्या होता है जब एक
बार कट के बाद हमारी
कोशिका को मानव कोशिकाओं
सहित क्षति को ठीक
करने के लिए मशीनरी
(machinery) होती है क्योंकि
आप हमारी कोशिकाओं
को जानते हैं जो विभिन्न
तनावों को उजागर
करते हैं और उनमें
से कुछ डीएनए (DNA) क्षति
का कारण बन सकते हैं
लेकिन तुरंत हमारे
सिस्टम को यकीन है
कि आप इनको जानते
हैं नुकसान तय हो
गए हैं और आप जो भी
इन प्रोटीनों के
बारे में बात कर रहे
हैं, वे कुछ और नहीं
बल्कि प्रोटीन हैं
जो मरम्मत की प्रक्रिया
में शामिल हैं।
आइए हम इस बारे में
चिंता न करें कि नाम
क्या है और विशिष्ट
कार्य क्या है, लेकिन
दो तरीके हैं जिनके
द्वारा यह कह सकता
है कि मान लें कि आपने
एक ही कटौती की है,
फिर क्या होता है,
यह आपको जानने की
कोशिश करता है कि
डीएनए बिट पॉलिश
(DNA bit polish) को हटा देता
है जो कुछ भी है और
फिर आपको डीएनए सील
(DNA seal) करने का पता करने
की कोशिश करता है।
इस प्रक्रिया में
ऐसा होता है कि आपके
द्वारा बनाए गए स्थान
पर कुछ अतिरिक्त

Hindi: 
स्थानो को जोड़ा
जा सकता है जहां आप
काटते हैं कि यह कहाँ
बना है या यह कुछ आधार
हो सकते हैं जिन्हें
हटा दिया गया है।
तो यह एक प्रकार की
आकस्मिक प्रक्रिया
(random process) है जो प्रतिस्थापन
हो सकती है, यह सम्मिलन
हो सकती है, इसे हटाया
जा सकता है।
इसलिए परिणामस्वरूप
आप जानते हैं कि आप
कुछ बदलाव करने जा
रहे हैं और उनमें
से कुछ जीन (gene) कार्यों
के तरीके को प्रभावित
कर सकते हैं क्योंकि
यह कोडिंग क्षेत्र
(coding region) को बदल सकता
है इसलिए प्रोटीन
नहीं बनता है।
आपने कुछ अमीनो एसिड
(amino acids) खो दिए हैं,
इसलिए यह मूल रूप
से जीन (gene) के कार्य
को बदल रहा है, लेकिन
आप किस प्रकार के
परिवर्तन करेंगे,
इसका कोई नियंत्रण
नहीं है।
आप उम्मीद करते हैं
कि आप जानते हैं कि
जीन (gene) के कुछ ख़राब
कार्य होंगे जो होने
की अधिक संभावना
है।
दूसरी प्रक्रिया
यह है कि आपने ऐसे
एंजाइम (enzyme) का चयन
किया है, जो आपने किसी
जीन (gene) की पहचान की
है, जिसे आप जानते
हैं कि आप इस क्रम
को जानते हैं, जैसे
कि आप जानते हैं कि
आपने दो कट लगाए हैं,
यदि आपके पास के दो
कट हैं, तो जो भी टुकड़ा
खो गया है बीच में
यह अपमानित की तरह
है।
 तो सेल जो करने की
कोशिश करता है वह
क्रोमोसोमल डीएनए
(chromosomal DNA) है जो अब बहुत
बड़ा है क्योंकि
छोटा हिस्सा खो गया
है।
ये दोनों अब एक साथ
जुड़ गए हैं।
जो कुछ खंड वहां था
उसके बीच में व्यवधान
है जो खो गया है।
इसलिए परिणाम के
रूप में आपके पास
एक उत्परिवर्तन (mutation)
होने वाला है जो अधिक
विलोपन की तरह है।
मान लीजिए कि एक जीन
दिया गया है, जो अपने
2 केबी (2kb) कहता है और
आपके पास दो साइट
हैं जिन्हें आप जानते
हैं जो कि 2kb के टुकड़े
से अलग होती है।
यदि आप काटते हैं
तो सिस्टम को मरम्मत
करने की अनुमति दें।
आपने बीच में 2kb खो
दिया है और आपने इसे
सील कर दिया है  इसलिए
जिन जीन (gene) को आप जानते
हैं वे दो एक्सॉन
(exon) या एक एक्सॉन (exon)
हैं जो खो गए हैं।
तो ऐसा करने का तरीका
है।
अन्य माइटोटिक सेल
(mitotic cell) में अधिक है
यह होमोलॉजी निर्देशित
सुधार (homology directed repair)
है जहां मूल रूप से
यह सेल उस क्षेत्र
को देखता है जो आपके
पूरक के प्रकार हैं
और फिर आप इसे ठीक
करने में सक्षम हैं
इसलिए उदाहरण के
लिए आप एक निर्माण
प्रकार हो सकते हैं
जहां आप ऐसा क्षेत्र
है जो समलिंगी (homologous)
हो तो वह जाकर उस सिलाई
को पहचानने की कोशिश
कर सकता है।
तो यह एक तरह का आप
इस पद्धति का उपयोग
करके सम्मिलन बना
सकते हैं, लेकिन यह

Hindi: 
है कि आप जानते हैं
कि आप इसे सभी सेल
प्रकारों में उपयोग
नहीं कर सकते हैं,
इस पर निर्भर करता
है कि आप क्या करना
चाहते हैं।
तो इस पूरी बात के
पीछे यही अवधारणा
है।
आइए हम इस बात पर गौर
करें कि यह क्या है?
जीनोम एडिटिंग (genome
editing) के लिए ये न्यूक्लीज
(nuclease) लोग क्या इस्तेमाल
करते हैं।
पहला उपद्रव जो कि
लोग उपयोग करना शुरू
करते हैं, प्रतिबंध
एंजाइम (restriction enzyme) की
तरह था जैसा कि हमने
कहा था कि हम आपको
एक डोमेन (domain) जानते
हैं जो मूल रूप से
डोमेन है जो डीएनए
को प्रतिबंध एंजाइम
(restriction enzyme) की तरह क्लीव
करने में सक्षम है।
लेकिन प्रतिबंध एंजाइम
(restriction enzyme) दो डोमेन
(domain) हैं एक nuclease डोमेन
है जो डीएनए को मदद
करता है यदि एंजाइम
को काटे गए डीएनए
(DNA) के लिए है, तो आपके
पास दूसरा डोमेन
(domain) है जो उस स्थान
को विशिष्टता देता
है जहां एंजाइम को
कट पर जाना चाहिए
जैसे कि आपने प्रतिबंध
एंजाइम (restriction enzyme) देखा
है।
उनके पास एक अद्वितीय
है जिसे आप जानते
हैं कि मान्यता प्राप्त
साइटों को दिए गए
अनुक्रमों (sequence) को
एंजाइम (enzyme) द्वारा
पहचाना जाता है और
यह वहां जाता है और
कट जाता है।
तो यहाँ भी यह एक ही
सिद्धांत है, इसलिए
आपके पास डीएनए बाइंडिंग
(DNA binding) है जो यहाँ केवल
एक ही अंतर है कि मान्यता
स्थल बहुत बड़े हैं
जैसे १४ आधार, १६ आधार
इसलिए आपके जीनोम
(genome) में ऐसी साइटों
की आवृत्ति (frequency) बहुत
कम सही है जिसे आप
जानते हैं संभावना
है कि आपको लगता है
कि इस तरह का संयोजन
बहुत कम है और इसलिए
यह नहीं जा रहा है
यदि आपने छोटे का
उपयोग किया है तो
आपको पता है कि एंजाइम
(enzyme) चार आधार की पहचान
करता है, तो यह आपके
जीनोम (genome) को काट
देने वाला है जो वांछनीय
नहीं है क्योंकि
यह अनुमति नहीं देता
है जीवित रहने के
लिए कोशिका लेकिन
यहां बहुत कम साइट
हैं इसलिए आप केवल
कुछ साइटों में कटौती
करने जा रहे हैं ताकि
वास्तव में सही मदद
मिले।
तो सबसे पहले एंजाइम
(enzyme) लोगों द्वारा
उपयोग किए जाने वाले
एंजाइम (enzyme) क्या हैं
इस एंजाइम (enzyme) को
Fok1 कहा जाता है और
फिर निश्चित रूप
से उन्होंने क्या
किया है?
उन्होंने उस विशेष
प्रोटीन के डीएनए
बाइंडिंग डोमेन (DNA
binding domain) को हटा दिया
है और फिर इसे कुछ
अन्य के साथ फ्यूज
करने का प्रयास करते
हैं जिसे आप डीएनए
बाइंडिंग प्रोटीन
(DNA binding protein) जानते हैं,
इसलिए आपने एक इंजीनियर
एंजाइम (engineered enzyme) बनाया।
तो ऐसा करके आप इस
nuclease Fok1 को पहचान सकते
हैं कि आप जो भी सही
क्रम चाहते हैं या
आप जानते हैं कि आपके
पास बहुत अधिक है
जिसे आप जानते हैं
कि किस सेगमेंट (segment)

Hindi: 
पर नियंत्रण किया
जा सकता है और कट सकता
है।
तो आइए ऐसे दो उदाहरणों
पर गौर करें, जिसे
एक जिंक फिंगर न्यूक्लियस
(zinc finger nuclease) के रूप में
कहा जाता है, दूसरे
को ट्रांसक्रिप्शन
एक्टीवेटर (transcription
activator) के रूप में कहा
जाता है जैसे कि एफिशिएंट
न्यूक्लियस (effector nuclease)
ओके।
ZFN संक्षिप्त नाम
है और TALEN एक है।
तो हम देखते हैं कि
यह दोनों एक ही अवधारणा
का उपयोग करते हैं
कि आपके पास एक डीएनए
बाइंडिंग डोमेन (DNA
binding domain) है जो एक स्पाइट
साइट्स (spite sites) को विशिष्टता
प्रदान करता है और
फिर आपके पास यह न्यूक्लियर
डोमेन (nuclease domain) है जो
डोमेन (domain) के बहुत
करीब कट जाता है।
इसलिए अक्सर यह एंजाइम
फ़ंक्शन (enzyme function) मंद
होता है क्योंकि
आपके पास एक सही होता
है और फिर आपके पास
एक दूसरा होता है
इसलिए आपको पता है
कि आप दो कटौती कर
सकते हैं और इसी तरह।
इसीलिए इसे यहाँ
दिखाया गया है, उदाहरण
के लिए यह सब मेगन्यूक्लिअस
(Meganucleases) नामक एंजाइम
(enzyme) से शुरू हुआ था
जिसकी अब सीमा है
क्योंकि यह जहाँ
भी सही है वहां केवल
ऐसे अनुक्रम (sequence)
को काट सकता है।
फिर उन्होंने इस
तरह के एंडोन्यूक्लेज
(endonuclease) को जिंक फिंगर
न्यूक्लियस (zinc finger
nuclease) कहा जाता है।
यहां जस्ता उंगली
कुछ भी नहीं है, लेकिन
ये संरचनात्मक डोमेन
(structural domains) हैं जो कई
प्रतिलेखन कारकों
में मौजूद हैं।
तो आपने प्रतिलेखन
कारक के बारे में
अध्ययन किया होगा।
ये उन प्रोटीनों
के सेट होते हैं जो
जाते हैं और कुछ अनुक्रम
(sequence) की पहचान करते
हैं जो जीन (gene) के प्रमोटर
क्षेत्र (promoter region) पर
स्थित हैं।
इसलिए, आप प्रतिबंधित
कर सकते हैं कि कौन
सा जीन चालू या बंद
है।
अक्सर ये एक्टिवेटर
(activator) होते हैं इसलिए
ये प्रोटीन ऐसे सिक्वेंस
(sequences) से बंध जाते
हैं और फिर सक्रिय
हो जाते हैं और अधिक
बार ऐसे सिक्वेंस
पलिंड्रोम (sequences palindrome)
दो डोमेन में मौजूद
होते हैं जिन्हें
आप दो सेगमेंट (segment)
के रूप में जानते
हैं और वे डिमेरर
और इतने पर फंक्शन
के रूप में चलते हैं।
इसलिए उन्होंने जो
किया है, उन्होंने
इस डीएनए बाइंडिंग
डोमेन (DNA binding domain) का
उपयोग किया है और
फिर न्यूक्लियर डोमेन
(nuclease domain) के लिए फ़्यूज़
(fuse) किया है, जैसे कि
आपको एक सैद्धांतिक
रूप से पता है कि आपके
पास इन अनुक्रमों
की पहचान करने वाला
यह खंड है और फिर आपके
पास यह न्यूक्लीज़
डोमेन (nuclease domain) है,
इसी तरह से आपके पास
एक ही प्रोटीन बाइंड
(protein binds) का एक अणु है
यहाँ और nuclease डोमेन
(domain) यह जहाँ आप चाहते
हैं एक कटौती कर सकते
हैं।
इसलिए यह उतना सरल
नहीं है जितना उन्होंने
किया है, उन्होंने
इन जिंक फिंगर बाइंडिंग

Hindi: 
डोमेन (zinc finger binding domain)
के लिए बड़ी संख्या
में म्यूटेंट (mutants)
बनाए हैं और इस तरह
उन्होंने देखा कि
वे कौन से सीक्वेंस
(sequence) हैं जिन पर यह
बाँध सकता है।
वास्तव में वे जान
सकते हैं कि यदि आपके
पास वांछित अनुक्रम
(desired sequence) है तो वे एंजाइमों
(enzymes) को ऐसे इंजीनियर
कर सकते हैं कि यह
उस अनुक्रम की पहचान
करेगा।
तो आपने क्या किया
है?
आप यह तय करते हैं
कि आप उत्परिवर्तन
(mutation) कहाँ बनाना चाहते
हैं और फिर डीएनए
बाइंडिंग डोमेन (DNA
binding domain) जो उससे जुड़
सकता है अनुक्रम
(sequence) आप जानते हैं
कि अब जिस तरह से आप
चाहते हैं कि हम आपके
एंजाइम (enzyme) को काट
सकते हैं।
ताकि आप जानते हैं
कि इस तरह की प्रणाली
विकसित की गई है, क्या
आप जानते हैं कि अब
ऐसी व्यावसायिक कंपनियाँ
हैं, जिन्होंने इन
एंजाइमों (enzymes) को
सिग्मा एल्डरिच (Sigma
alderich) में से एक बनाने
में विशेषज्ञता हासिल
की है, इसलिए वे क्या
करते हैं कि आप अनुक्रम
(sequence) देते हैं या वे
भविष्यवाणी करते
हैं कि आप इस क्षेत्र
में क्या क्रम देखते
हैं हटाना चाहते
हैं और फिर वे प्रोटीन
को ऐसे इंजीनियर
करते हैं कि यह अनुक्रम
(sequence) की पहचान करेगा।
इसमें शामिल एक श्रमसाध्य
प्रक्रिया है।
अन्य एक बहुत ही जिंक
फिंगर डोमेन (zinc finger
domain) के समान है, लेकिन
उन्होंने एक एंजाइम
(enzyme) का इस्तेमाल किया
है फिर से एंजाइम
(enzyme) को खेद नहीं है
इसके प्रतिलेखन कारक
को जो आमतौर पर रोगज़नक़ों
द्वारा संक्रमित
पौधों द्वारा बनाए
जाते हैं।
तो ये वे रोगज़नक़
हैं जिन्हें आप हमारे
वायरस और अन्य लोगों
को पसंद करते हैं
और वे आपके सिस्टम
में आते हैं और फिर
आपके सिस्टम को हाईजैक
(hijack) करते हैं।
उदाहरण के लिए वायरस
आपके सेल में प्रवेश
कर सकता है और फिर
हाईजैक ट्रांसक्रिप्शन
(hijack transcription) की एक ही
मशीनरी (machinery) का उपयोग
कर सकता है, अनुवाद
को अपना प्रोटीन
बनाने के लिए।
उसी तरह ये प्रोटीन
हैं जो रोगज़नक़
द्वारा बनाए जाते
हैं, लेकिन अब सिस्टम
को हाईजैक (hijack) करते
हैं, इसलिए उन्होंने
इनका उपयोग किया
है जो कि आप जानते
हैं कि इन प्रोटीनों
के लिए कोड जो कि इंजीनियर
जीनोम (engineer genome) में
प्रतिलेखन उत्प्रेरक
हैं, मुख्यतः पौधे
जीनोम उदाहरण के
लिए जो यहां दिखाया
गया है।
संयंत्र जीनोम है।
तो फिर से अवधारणा
बहुत समान है आप यहाँ
डीएनए बाइंडिंग डोमेन
(DNA binding domain) nuclease डोमेन
के लिए जुड़े हुए
हैं और आप इंजीनियर
कर सकते हैं कि जो
भी अनुक्रम अब आप
चाहते हैं कि कम या
ज्यादा वहाँ पर दरार
करने में सक्षम हो
जाएगा।
तो मूल रूप से आप इस
प्रोटीन को बनाते
हैं और फिर वितरित
करते हैं, इसलिए आप
प्रोटीन को कोशिका
में जाने के लिए बनाते

Hindi: 
हैं और वहीं व्यक्त
करते हैं और फिर एक
बार जब प्रोटीन होता
है, तो डीएनए (DNA) के
एक क्षेत्र को साफ
करने वाला होता है
और आप जानते हैं कि
इस तरह के कट हैं तब
बने सेल में इस प्रक्रिया
को ठीक करने की कोशिश
की जाती है, जैसा कि
हमने पहले चर्चा
की थी।
खो सकता है।
लाभ हो सकता है।
परिणाम में परिवर्तन
हो सकता है क्योंकि
जीन (gene) का कार्य सही
खो जाता है और फिर
आप पौधों को बढ़ने
देते हैं और पौधों
के मामले में वांछित
फेनोटाइप (phenotype) को
देखते हैं, जानवरों
या सेल लाइनों के
मामले में भी हम ऐसा
कर सकते हैं।
आप जानते हैं कि आप
इसके लिए जा सकते
हैं, उदाहरण के लिए
भ्रूण स्टेम सेल
(embryonic stem cells) आप इन न्यूक्लीज
(nuclease) का परिचय दे सकते
हैं कि आपके साथ कुछ
हो रहा है, आपको पता
है कि सेल में वांछित
परिवर्तन हुआ है
या नहीं।
अगर ऐसा हुआ है, तो
पशु पैदा करें, इसलिए
इसमें इस तरह के बदलाव
होने जा रहे हैं।
तो यह एक और मजबूत
तरीका है क्योंकि
आप वास्तव में उन
सभी निर्माणों को
नहीं देख रहे हैं
जिनकी हमने चर्चा
की थी।
इसलिए समय व्यतीत
करने वाले निर्माण
आपको पता है कि अब
आपको क्या करना है।
आप nuclease इंजीनियर कर
सकते हैं तो सेल में
पेश करें यह बाकी
चीजों को करेगा।
इसलिए यह बहुत आसान
और अधिक कुशल हो जाता
है, क्योंकि हमने
जिस चर्चा पर चर्चा
की है, उसकी तुलना
में फिर से यह वैश्विक
चीज है, इसलिए यह एक
सशर्त अधिकार नहीं
है, इसलिए यह एक और
प्रक्रिया है, लेकिन
जीनोम संपादन (genome
editing) में अधिक हालिया
विकास यह है कि इसे
क्या कहा जाता है
CRISPR cas9 की मध्यस्थता
जीनोम (genome) संशोधन
(modifications) है और ये बड़े
पैमाने पर सामने
आते हैं क्योंकि
यह बहुत अलग तरह की
चीजों का उपयोग करता
है।
तो वास्तव में अब
आप पिछले उपकरणों
को जान सकते हैं कि
ZFN और दूसरा जो हमने
इस बारे में बात की
थी, आप एक प्रोटीन
पर निर्भर हैं, जिसका
बाइन्डिंग डोमेन
(domain) निर्धारित करता
है कि कट कहां हो सकता
है इसलिए आपको पता
है कि आपको कुछ सोचना
होगा अनुक्रम (sequence)
जिस पर आप जानते हैं
कि आप जानते हैं कि
आपका प्रोटीन जाता
है और बांधता है और
उस समय जटिलता हो
सकती है क्योंकि
अनुक्रम ऐसा हो सकता
है कि आप जानते हैं
कि आप उस विशेष अनुक्रम
के लिए डीएनए बाइन्डिंग
डोमेन (DNA binding domain) प्राप्त
करने में असमर्थ
हैं।
यह जटिलता उस जीनोम
(genome) को बना देती है
जहाँ आप उत्परिवर्तन
(mutation) करना चाहते हैं,
अपनी दक्षता को सीमित
नहीं कर सकते हैं
जिसके साथ आप डीएनए
बाइन्डिंग डोमेन
(DNA binding domain) के ऐसे उत्परिवर्ती
उत्पन्न करने में

Hindi: 
सक्षम हैं।
तो आप उन्हें प्राप्त
करने में सक्षम नहीं
हो सकते हैं, इसलिए
यह सीमा है क्योंकि
आपको कई बार बड़ी
संख्या में म्यूटेंट
(mutant) को स्क्रीन करना
पड़ता है।
तो यह CRISPR cas9 वास्तव
में इस तरह के डीएनए
बाइन्डिंग डोमेन
(DNA binding domain) के बारे में
परेशान नहीं करता
है, इसलिए इससे पहले
कि आप हमें बताएं
कि ये सिस्टम क्या
है और जहां से हमने
इस तरह के इंजीनियर
न्यूक्लियर (engineered
nucleases) विकसित किए हैं।
तो मूल रूप से ठीक
वैसे ही जैसे हमारे
शरीर में इम्यून
सिस्टम (immune system) होता
है, जहां हमारे पास
ऐसी कोशिकाएं होती
हैं जो किसी भी विदेशी
के खिलाफ लड़ती हैं,
जिसे आप जानते हैं
कि बैक्टीरिया या
वायरस जो बैक्टीरिया
में पाए जाते हैं,
उनमें भी एक प्रतिरक्षा
प्रणाली होती है
और यह कैसी 9 ऐसी प्रणाली
है, जिसके प्रवेश
को रोकता है उदाहरण
के लिए किसी भी विदेशी
डीएनए बैक्टीरियोफेज
(DNA bacteriophage) का उदाहरण
दें क्योंकि यह वह
जीवाणु है और वे या
कुछ अन्य वायरस डीएनए
(viruses DNA) को पेश कर सकते
हैं।
इसलिए वे इम्यून
(immune) करना चाहते हैं
और इस तरह के डीएनए
(DNA) की पहचान कर उन्हें
सही हटाते हैं।
तो यह बहुत ज्यादा
है कि यह तंत्र है
कि यह इस का उपयोग
करता है के रूप में
बुलाया नियमित रूप
से छोटी palindromic दोहराने
interspaced है।
बहुत लंबा क्रम लेकिन
यह जो कहता है; आपके
पास जीवाणु के जीनोम
(genome) में सेगमेंट हैं
जिसमें पैलिंड्रोमिक
अनुक्रम (palindromic sequences)
हैं।
Palindromic यह है कि आपके
पास उदाहरण के लिए
abcd है यही क्रम है
और फिर यह उदाहरण
cba के लिए उल्टा होगा,
ठीक इसी तरह का palindrome
अभी इस तरह के लघु
अनुक्रम palindromic अनुक्रम
का अर्थ एक दूसरे
के करीब मौजूद है
- ये परस्पर जुड़े
हुए अर्थ हैं निरंतर
नहीं लेकिन बीच में
अन्य अनुक्रम (sequence)
हैं।
इस तरह के अनुक्रम
वास्तव में आपको
रोगज़नक़ के खिलाफ
लड़ने में मदद करते
हैं।
इसलिए इसे कहा जाता
है क्योंकि आप इस
क्लस्टर के संक्षिप्त
नाम को नियमित रूप
से सीआरआईएसपीआर
(CRISPR) नामक छोटे पैलिंड्रोमिक
(palindromic) दोहराव को काटते
हैं और फिर क्या आपको
पता है कि इन क्लस्टर
राइट (cluster right) सीआरआईएसपीआर(CRISPR)
से जुड़े हैं इसलिए
उन्हें कैस 9 राइट
कहा जाता है।
तो जो भी कैस जीन्स
(genes) है, वही है।
तो यह कैसे काम करता
है इसलिए आपके पास
यहां जो दिखाया गया
है वह बैक्टीरियल
जीनोम (bacterial genome) है
और फिर आपके पास यह
कैस 9 जीन (gene) है और
फिर इसके करीब है
कि आपके पास यह है
कि आप समूहों को सही
जानते हैं और विचार
यह है कि आपके पास

Hindi: 
जहां भी यह क्लस्टर
(cluster) है तब आरएनए का
उत्पादन किया जाता
है और फिर आरएनए वास्तव
में एक निगरानी के
रूप में मदद करता
है और किसी भी विदेशी
डीएनए (DNA) की तलाश
करता है यदि यह है
तो यह नीचा हो जाता
है।
इससे ऐसा कैसे होता
है?
जैसे कि जब आपका विदेशी
डीएनए किसी संक्रमण
के कारण आता है, तो
यह होता है कि यह प्रणाली
वास्तव में डीएनए
(DNA) का हिस्सा है और
इन समूहों के चारों
ओर एक अन्य जीवाणु
जीनोम (bacterial genome) के
हिस्से के रूप में
एकीकृत होती है, ठीक
है।
यह कहता है कि आपकी
प्रतिरक्षा कोशिकाओं
की तरह ही अगर कोई
विदेशी शरीर इसमें
मिलता है तो आपको
पता है कि आपके इम्यून
सेल उन पर हमला करते
हैं जो प्रोटीन को
पचते हैं और इस प्रोटीन
का एक हिस्सा आपके
एमएचजी (MHG) कॉम्प्लेक्स
को सही तरीके से पेश
करते हैं इसलिए सिस्टम
को अलर्ट किया जाता
है क्योंकि ये पेप्टाइड
(peptide) हैं संभवतः विदेशी
आक्रमणकारी के रूप
में मौजूद हैं, ठीक
उसी तरह और फिर यह
क्लस्टर सक्रिय हो
जाता है इसलिए, टेप
बनाए जाते हैं टेप
इस तरह के होते हैं
कि आपके पास यह है
कि आप विदेशी डीएनए
अनुक्रम (DNA sequence) के
साथ टुकड़े भी जानते
हैं।
तो क्या होता है ये
आरएनए (RNA) जाता है
और होमोलॉजी (homology)
के लिए खोज करता है
और जहां भी आपके पास
एक डीएनए (DNA) है जो
सिर्फ होमोलॉगस (homologous)
है जो अब शामिल हो
गया है तो यह आप में
जाना जाता है कि आप
जानते हैं कि डीएनए
(DNA) में कटौती की जाती
है और यह नीचा दिखाने
की कोशिश करते हैं।
कैसे किया जाता है।
तो दूसरे शब्दों
में, आप एक डीएनए (DNA)
को काटने जा रहे हैं
जिसका अनुक्रम आरएनए
(sequence RNA) से मेल खाता
है कि कैस 9 जीन सही
नियंत्रित करता है।
यह मूल रूप से है या
यह CRISPR locus regu नियंत्रित
करता है जैसे आपने
यहाँ दिखाया था इसलिए
हमारे पास एक प्राथमिक
टेप है जो कि बना है
और फिर उनके पास यह
क्षेत्र है और इसे
क्रैना कहा जाता
है और यदि यह कहीं
भी मिलता है तो होमोलॉग
(homology) और ठीक करने के
लिए।
तो यह है कि यह कैसे
है।
तो यह बैक्टीरिया
में आने वाले किसी
भी आक्रमण से बचाव
करना है।
तो आइए देखें कि हमने
किस तरह से इंजीनियर
बनाया है कि आप अपने
फायदे के लिए जटिल
तंत्र (complex mechanism) को
जानते हैं इसलिए
हम अपने जीनोम को
उसी तरह संपादित
कर सकते हैं जिस तरह
से हम चाहते थे।
इसलिए दो तरीके हैं
जिनके द्वारा हम
कर सकते हैं; यह पहला
ऐसा है जो बाईं ओर
दिखाया गया है यह
जीनोम इंजीनियरिंग
(genome engineering) है।
यह फिर से यह एक nuclease
है क्योंकि यह डीएनए
(DNA) को काटता है क्योंकि
यह इस और ZFN nuclease के बीच

Hindi: 
का अंतर है जिसे हमने
पहले चर्चा की है।
तो वहाँ पर nuclease एक
डीएनए बाइंडिंग डोमेन
(DNA binding domain) पर निर्भर
करता है ताकि एक अनुक्रम
की पहचान की जा सके
जहाँ उसे काटना पड़ता
है यहाँ nuclease RNA पर निर्भर
है जो सिस्टम के साथ
आता है इसलिए RNA उस
विशेष RNA अनुक्रम
(sequence) के लिए होमोलोजी
(homology) की तलाश करेगा
जहाँ भी जीनोम आपके
पास है, इसे काटने
के लिए।
यह वह आरएनए (RNA) है
जो यहां दिखाया गया
है और आप जो कर सकते
हैं, वह है कि हम आरएनए
(RNA) को इंजीनियर कर
सकते हैं, जैसे कि
आप अनुक्रम (sequence) का
एक छोटा सा खंड डालते
हैं, जो उस जीनोम के
पूरक हैं जहां आप
चाहते हैं कि उन्हें
ठीक कर दें।
इसलिए यदि आप आरएनए
(RNA) के साथ कैस 9 काम्प्लेक्स
(complex) बनाते हैं, जिसे
आरएनए (RNA) कहा जाता
है, क्योंकि यह वास्तव
में न्यूक्लियस (nuclease)
को यह बताने में मदद
करता है कि उसे कहां
जाना चाहिए, तो अब
आपको कट जाना चाहिए,
यदि आप उदाहरण के
लिए जीन इलेवन चाहते
हैं, तो मैं इस क्रम
का हिस्सा लेता हूं
यह जीन एक्स के एक
महत्वपूर्ण क्षेत्र
में है और आरएनए (RNA)
तब जाकर जीन एक्स
(gene X) के चारों ओर न्यूक्लियस
(nuclease) की स्थिति को
ठीक करने जा रहा है।
तो फिर यह निश्चित
रूप से यह nuclease कर सकता
है कि यह डबल स्ट्रैंड
(double strand) में कटौती
करता है ठीक उसी तरह
जो आपने बनाया था
और फिर उसी तंत्र
को अनुमति दें ताकि
आपका सेल गैर-होमोलॉजिकल
एंड ज्वाइनिंग (non-homologous
end joining) या अन्य होमोलॉजी
(homology) निर्देशित मरम्मत
को जान सके।
तो इस प्रक्रिया
में या तो आप एक क्षेत्र
को हटा सकते हैं या
आप एक नए अनुक्रम
(sequence) में डाल सकते
हैं जैसे कि आप प्रविष्टि
जानते हैं इसलिए
वही दृष्टिकोण जिसे
हमने पहले चर्चा
की थी।
यह केवल या तो म्यूटेशन
(mutation) को हटाने या बनाने
के लिए या जीनोम (genome)
में एक छोटे सेगमेंट
(segment) को पेश करने के
लिए है, लेकिन आप उसी
तरह से भी कर सकते
हैं जिस तरह से हमने
इस अन्य दो nucleases में
चर्चा की है, जिसे
डीएनए बाइंडिंग डोमेन
(DNA binding domain) मिला है आप
भी इंजीनियर कर सकते
हैं जैसे कि आपके
पास दो जटिल हैं केसी
9 में से जो एक दूसरे
के करीब बैठते हैं
जिन्हें आप जीनोम
(genome) के खंड के बारे
में जानते हैं क्योंकि
हम गाइड आरएनए (guide
RNA) को डिजाइन कर सकते
हैं जैसे कि यह जीनोम
(genome) के एक दूसरे के
बहुत करीब आता है
और फिर क्या होता
है ये कटौती इस केस
9 के म्यूटेंट को कहते
हैं जिसे कहा जाता
है के रूप में निक
के रूप में यह एक डबल
फंसे कटौती नहीं
करता है, लेकिन यह
सिर्फ डीएनए (DNA) के
एक कतरा काट सही ये
हैं कि उत्परिवर्तित
हैं।
परिणामस्वरूप अब
क्या होता है, फिर
से आपका सिस्टम (system)
आपको यह जानने की
कोशिश करता है कि
निक के कारण जो हस्तक्षेप

Hindi: 
करने वाला अनुक्रम
(sequence) बना है, तब तक
नहीं चलेगा तो आप
फिर से एक नया होमियोलॉजी
निदेशक मरम्मत तंत्र
लगा सकते हैं, इससे
आपको अपने विदेशी
डीएनए (DNA) को एकीकृत
करने में मदद मिल
सकती है क्योंकि
यह बहुत ज्यादा होमोलॉजी
(homology) के लिए लग रहा
है तो यह केवल डीएनए
(DNA) जहां इस तरह के
nicks बनाया जाता है।
तो यह अंदर जाता है
और आप इस तरह का क्रम
बना सकते हैं, उदाहरण
के लिए आप एक मरम्मत
को ठीक करना चाहते
हैं जो आपको पता है
कि डीएनए (DNA) में एक
त्रुटि को ठीक करना
था उत्परिवर्तन (mutation)
और आप म्यूटेशन को
फिर से जंगली प्रकार
में डाल देना चाहते
हैं ताकि आप इन दृष्टिकोणों
का उपयोग कर सकें
और इसलिए, आप जानते
हैं कि ये नए डीएनए
इसे ठीक करने के लिए
जा सकते हैं।
तो यह इस प्रक्रिया
में उल्लेखनीय है
आप त्रुटि को सही
कर सकते हैं।
तो यह CRISPR cas9 इतनी शक्तिशाली
हो गई है कि दस साल
के भीतर ही आपको पता
चल जाएगा कि आप इस
प्रणाली को शुरू
कर रहे हैं, तो आपको
पता चल जाएगा कि इसका
आवेदन दो साल पहले
आए पेपर में से एक
है जो सही बात करता
है मानव कोशिकाओं
से हम देख सकते हैं
कि यहां कुछ उदाहरण
हैं, मानव कोशिकाएं
चूहे, खरगोश, मेंढक,
ज़ेबरा मछली और क्या
नहीं पौधों से लेकर
बैक्टीरिया तक खमीर
तक आप जानते हैं कि
आप जीनोम (genome) को जिस
तरह से आप चाहते हैं
उसे संपादित करने
में सक्षम हैं।
तो यह बहुत ही आप मजबूत
तकनीक और व्यापक
प्रयोज्यता को जानते
हैं और आप सभी की जरूरत
जीनोम के अपने अनुक्रम
(sequence) है क्योंकि आप
गाइड आरएनए (guide RNA) बनाना
चाहते हैं जो काफी
अच्छा है।
इसलिए अब से हमने
चर्चा की है कि ऐसी
कई प्रजातियां हैं
जिनके बारे में आप
जानते हैं कि डीएनए
अनुक्रम (DNA sequence) रहा
है।
हमारे लिए इस तरह
के संपादन करना वास्तव
में बहुत आसान है
इसलिए यह वास्तव
में मदद करता है।
इसलिए यह न केवल आपके
लिए प्रतिबंधित है,
बल्कि सेल लाइन्स
या जानवरों का हाल
ही में हाल ही में
पिछले महीने नवंबर
2016 में पता चला है
कि इस तरह के कैंसर
के लिए एक उत्परिवर्तन
को ठीक करने का पहला
प्रयास है मामला
यह है कि यह मानव में
फेफड़े का कैंसर
है, मामला अनुमोदित
था, एक चीनी समूह वास्तव
में इस दृष्टिकोण
का उपयोग करता था।
दृष्टिकोण मानव शरीर
से कोशिकाओं को लेना
है और त्रुटि को ठीक
करना है और सेल को
वापस लाना है, इसलिए
आप जानते हैं कि आप
इसे नियंत्रित करने
में सक्षम हैं इसलिए
हमें इंतजार करना
होगा और देखना होगा
कि यह दृष्टिकोण
कितना अच्छा है लेकिन
यह वादा है कि आप जानते
हैं विशाल और लोग
सोच रहे हैं कि अगर
वास्तव में काम करता

Hindi: 
है और अगर उसमें उस
तरह की विशिष्टता
है, जिसके बारे में
हम आपसे बात कर रहे
हैं, तो उस जीन को
ठीक करने में सक्षम
होना चाहिए जो वे
चाहते हैं और यह एक
शक्तिशाली चिकित्सीय
क्षमता हो सकती है
जिसे इस विशेष दृष्टिकोण
कहा जाता है।
इसलिए कि आप जानते
हैं कि इस व्याख्यान
का अंत होता है और
फिर हम बाकी तकनीक
को देखेंगे जो हमारे
अगले व्याख्यान में
जीनोम (genome) के संपादन
में हमारी मदद करती
हैं।
