
Spanish: 
El sistema CRISPR Cas9 guiado por ARNg ha revolucionado la ingeniería genética al permitir la
modificación genómica dirigida a través del diseño simple de
una secuencia de guía de 20 pares de bases. Esta innovadora
tecnología utiliza una guía corta de ARNg (RNAsg) para dirigir la nucleasa Cas9 a un locus
genómico específico a través del emparejamiento de bases complementarias. La guía ARN o ARNg es responsable de
genómico específico a través del emparejamiento de bases complementarias. La guía ARN o ARNg es responsable
y se deben tener en cuenta muchas consideraciones durante
el proceso de diseño.
En nuestros videos anteriores presentamos brevemente el sistema CRISPR Cas9
y presentamos las diferentes herramientas y métodos disponibles para su expresión en sistemas vivos;
aquí revisaremos los criterios de
diseño del ARNg y le presentaremos los programas online
que simplifican este procedimiento. Te invitamos
a ver nuestros videos anteriores antes de 

English: 
The RNA-guided CRISPR Cas9 system has revolutionized genetic engineering by allowing targeted genomic
modification through the simple design of
a 20 base pair guiding sequence. This groundbreaking
technology utilizes a short guide RNA (sgRNA) to direct the Cas9 nuclease to a specific
genomic locus through complementary base pairing. The guide RNA or sgRNA is responsible for
the specificity of the CRISPR Cas9 system,
and many considerations need to be taken during
its design process. In our previous videos
we introduced the CRISPR Cas9 system briefly
and presented the different tools and methods available for their expression in living systems;
here we will go over the design criteria of
the gRNA and introduce you to the online programs
that simplify this procedure. We invite you
to watch our previous videos first before

Spanish: 
continuar con este video. En bacterias y 
arqueas, el ARN CRISPR (ARNcr) y el ARN transactivador  
CRISPR (ARNtracr) forman un complejo que actúa como dispositivo de referencia para dirigir la
nucleasa Cas9 a los materiales genéticos foráneos invasores. La capacidad del andamiaje del ARNtracr 
nucleasa Cas9 a los materiales genéticos foráneos invasores. La capacidad del andamiaje del ARNtracr 
simplificando las alteraciones de las guías de génicas, dirigiéndolas
a un sistema de un componente, todo para a un sistema de un componente, todo para 
una eficiencia igual o superior.
La especificidad de direccionamiento del sistema CRISPR Cas9 está determinada
por la secuencia de 20 nucleótidos en el extremo 5 '
del ARNg. Para el sistema CRISPR Cas9 de S.pyogenes,
la secuencia diana deseada debe 
preceder inmediatamente a un motivo adyacente 5'-NGG
con la cadena complementaria de la secuencia
diana donde la nucleasa
Cas9 media una ruptura de 
doble cadena ~ 3 nucleótidos corriente arriba

English: 
continuing with this one. In bacteria and
archaea, the CRISPR RNA (crRNA) and transactivating
CRISPR RNA (tracrRNA) form a complex which acts as the homing device for directing the
Cas9 nuclease to the invading foreign genetic materials. The tracrRNA’s scaffolding ability
along with the specificity of the crRNA can be combined into a single synthetic gRNA,
simplifying guiding of targeted gene alterations
to only a one-component system all while maintaining
equal or higher efficiency. The targeting
specificity of the CRISPR Cas9 system is determined
by the 20 nucleotide sequence at the 5’
end of the gRNA. For the S. pyogenes CRISPR
Cas9 system, the desired target sequence must
immediately precede a 5’-NGG protospacer
adjacent motif (PAM). The gRNA base pairs
to the complementary strand of the target
sequence where the Cas9 nuclease  mediates
a double strand break around 3 nucleotides upstream

Spanish: 
de la secuencia PAM. Observe que la secuencia de PAM
no es parte de la secuencia de ARNg de 20 pares de bases,
sin embargo, su presencia en el ADN genómico es
esencial para la edición del genoma Cas9 de CRISPR.
Hay tres puntos a considerar al momento de diseñar
un ARNg que se relacionan con la secuencia de
la guía de 20 pares de bases: 1) Contenido
de GC: el rango típico de contenido de GC es entre 40%
 - 80%. Un contenido de GC más alto estabiliza el dúplex de ARN:
ADN mientras desestabiliza la hibridación 
diana; 2) Longitud: la longitud
puede ajustarse y variar de 17-24 pares 
de bases. Una secuencia más corta conduce
a efectos off-target (17 pares de bases es el límite más bajo
en la longitud de la secuencia guía,
cualquier secuencia más corta que 17 tiene una probabilidad estadística
 de dirigirse a múltiples loci genómicos); 
y
3) Factores potenciales para ediciones off-target: El desajuste
 entre el ARNg y el sitio diana 

English: 
of the PAM sequence. Note that the PAM sequence
is not a part of the 20 base pair gRNA sequence,
however, its presence in the genomic DNA is
essential for CRISPR Cas9 genome editing.
There are three points to consider when designing
your gRNA which relate to the sequence of
the 20 base pairs guiding sequence: 1) GC
content: the typical range is between 40%
- 80% GC content. A higher GC content stabilizes
the RNA: DNA duplex while destabilizing off
target hybridization; 2) Length: the length
could be adjusted and range from 17-24 base
pairs. A shorter sequence leads to minimized
off target effects (17 base pairs is the lowest
limit on the length of the guiding sequence,
any sequence shorter than 17 has a statistical
chance of targeting multiple genomic loci);
and
3) Potential Off Target Effects: Mismatch
tolerance between the gRNA and target site

English: 
is what leads to off target effects of the
CRISPR Cas9 system and in general they depend
on 1) position of the mismatch; 2) number
of mismatches in a given gRNA; 3) the sequence
of the guide RNA; and 4) concentration of
the gRNA and Cas9 transfected. For the purpose
of creating a small InDel mutations through
non-homologous end joining, there are many
possible target sites across any protein.
Targeting closer to the N’ terminus of a
protein coding region is more desirable, because
a frameshift is more likely to be deleterious
if most of the protein has not yet been translated.
Also, both the coding and non-coding strand
of the genomic DNA can be targeted as they
are both equally efficient at creating InDel
mutations. If Homology Directed Repair is
needed for genome editing, however, the choice
of target site is far more constrained by
the desired location of insertion. For more
information about non-homologous end joining
(NHEJ) and Homology Directed Repair, please

Spanish: 
es lo que conduce a ediciones off-target en el
sistema CRISPR Cas9, y en general, dependen
de 1) la posición del desajuste; 2) número
de desajustes en un ARNg dado; 3) la secuencia
 del ARN guía; y 4) la concentración del
 ARNg y Cas9 transfectado. Con el propósito
de crear pequeñas mutaciones InDel a través
de recombinación no homóloga, existen muchos
sitios diana a través de cualquier proteína.
El enfocarse más de cerca en el extremo N 'de una
región de codificación de proteínas es más deseable, porque
es más probable que un cambio de marco de lectura sea perjudicial
si la mayoría de las proteínas aún no se han traducido.
Además, tanto la cadena codificante como la cadena no codificante
del ADN genómico pueden ser dirigidas ya que
ambas son igualmente eficaces en la creación de mutaciones
InDel. Sin embargo, si la reparación dirigida por homología
es necesaria para la edición del genoma, la elección
del sitio objetivo está mucho más limitada por
la ubicación de inserción deseada. Para obtener más
información sobre la recombinación no homologa
(NHEJ) y la reparación dirigida por homología, revisa   

English: 
see our introductory video on the CRISPR/Cas9
system. With the tips in designing sgRNA taken
into consideration, from PAM sequences to
target sites to GC content, we can now choose
a sgRNA. Websites like Chop Chop Harvard provide
an easy-to-use system in designing the sgRNA
against any gene of interest. To utilize this
technology, click on the link of chop chop
Harvard in the description of this video.
Select the species of interest from the drop
down menu. Species-specific gene IDs, genomic
coordinates or entire nucleotide sequences
can be cut and pasted in for analysis. Click
on the Find Target Sites! Button and wait
for the analysis to be completed. Once the
analysis is done, a graphic representation
of the sequence will be provided, displaying
the various potential sgRNAs shown in their
respective positions by base pairs. Scrolling
the mouse over these various sgRNA representations
will show the website’s ranking with respect
to the best sgRNA to use for that gene. Below

Spanish: 
nuestro video introductorio sobre el sistema CRISPR / Cas9.
Con los consejos proporcionados el diseño de ARNsg,
desde las secuencias de PAM hasta
los sitios objetivos  y el contenido de GC, ahora podemos elegir
un ARNsg. Sitios web como Chop Chop Harvard proporcionan
un sistema fácil de usar para diseñar el ARNsg
de cualquier gen de su  interés. Para utilizar esta 
tecnología, haga clic en el enlace de chop chop
Harvard en la descripción de este video.
Seleccione las especies de su interés en el menú desplegable.
Los identificadores de genes específicos por especie (gene IDs)
las coordenadas genómicas o las secuencias de nucleótidos
enteras se pueden cortar y pegar para el análisis. ¡haga clic
en el botón Find target sites! y espere 
a que se complete el análisis. Una vez que se
realiza el análisis, se proporcionará una
representación gráfica de la secuencia, que muestra
diversos ARNg potenciales que se muestran en sus
respectivas posiciones por pares de bases. Al desplazar Al desplazar 
el mouse sobre estas representaciones de ARNsg
mostrará la clasificación del sitio web con respecto
al mejor ARNsg que se utilizará para ese gen. A continuación

English: 
will be a list of all possible sgRNAs and
the breakdown of their rankings, based on
genomic location, GC content, and Off-targets.
To ensure maximum sgRNA efficiency, knowing
the number of off-target effects is very important.
For more information on each sgRNA candidate,
one can click on each choice and view gRNA
and the PAM sequence in their genomic context.
One can also view information on the off-targets,
if any, as well as information on the various
primers that will encompass the sgRNA target
sequence and could be used for monitoring
the genetic modification process. While Chop
Chop Harvard is one method of designing sgRNA,
there are many other websites such as the
Broad Institute and BioTools that could also
be utilized. To locate abm’s vast repertoire
of sgRNA libraries, start by finding us at
our homepage at www.abmgood.com. From there
start by clicking on “CRIPSR/Cas9”. You

Spanish: 
se muestra una lista de todos los posibles ARNsg y 
el desglose de sus clasificaciones, en función de la
ubicación genómica, el contenido de GC y posibles Off-targets.
Para garantizar la máxima eficacia de ARNsg, conocer
la probabilidad de ediciones off-target es muy importante.
Para obtener más información sobre cada alternativa de ARNsg,
uno puede hacer clic en cada opción y ver ARNg
y la secuencia de PAM en su contexto genómico.
También se puede ver información sobre los off-target
si los hay, también vera información sobre los diversos
Primers que abarcarán la secuencia diana de ARNg y podrían
usarse para controlar el proceso de modificación
genética. Si bien Chop Chop 
Harvard es un método para diseñar ARNsg,
existen muchos otros sitios web, como
Broad Institute y BioTools, que también
podrían utilizarse. Para encontrar el amplio repertorio de ARNsg
of sgRNA libraries, de ABM, comience por ingresar a nuestra
página web www.abmgood.com. Desde allí,
haga clic en "CRIPSR / Cas9"

English: 
will be taken to our CRISPR/Cas9 product page
which features everything required for carrying
out successful genome modification through
the CRISPR Cas9 system. By clicking on Genome-wide
sgRNA libraries, or alternatively scrolling
to the bottom of the page you will find our
sgRNA products sorted by gene names. Our sgRNAs
are provided in different formats, including
Lentiviral vectors, packaged lentiviruses,
adenoviruses, and even AAVs - which will be
added soon. After choosing the vector you’d
like to use for sgRNA delivery, the search
bar allows you to search by gene symbol or
accession number, or you can use the alphabetical
sorting to find your gene of interest. Once
you’ve selected a gene, you can find all
available sgRNA products relating to your
selection will be displayed. From here you
can order your sgRNA products. Please leave
your questions and comments below and we will

Spanish: 
Serás llevado a nuestra página de productos CRISPR / Cas9
que cuenta con todo lo necesario para llevar a cabo la
modificación exitosa del genoma a través
del sistema CRISPR Cas9. Al hacer clic 
 en nuestro amplio directorio de ARNsg genómicos, o al desplazarse al
final de la página, encontrará nuestros 
productos de ARNsg ordenados por nombres de genes. Nuestros ARNsg
se proporcionan en diferentes formatos, incluidos 
vectores retrovirus, lentivirus empaquetados,
adenovirus e incluso AAV, que se 
agregarán pronto. Después de elegir el vector que 
desea usar para la transfección de ARNsg, busque la barra de búsqueda
 le permitirá buscar por símbolo de gen o
número de acceso, o puede usar la clasificación alfabética
para encontrar su gen de interés. Una vez que haya 
seleccionado un gen, podrá encontrar todos los productos de ARNsg
disponibles relacionados con su
selección. Desde aquí puede
ordenar productos de ARNsg. Por favor
deja tus preguntas y comentarios a continuación y le

English: 
answer them as soon as possible. For more
information please visit our website. Thank
you for watching!

Spanish: 
responderemos lo antes posible. Para obtener
 más información, visita nuestro sitio web.
 ¡Gracias!
